同源異型盒基因與成釉細(xì)胞瘤發(fā)生發(fā)展及誘導(dǎo)分化的研究.pdf

1、目的：成釉細(xì)胞瘤是最常見(jiàn)的牙源性腫瘤，好發(fā)于下頜骨，具有浸潤(rùn)性生長(zhǎng)特性，主要來(lái)源于牙胚發(fā)育中未退化的牙源性上皮，目前對(duì)其發(fā)生發(fā)展機(jī)制還不清楚?，F(xiàn)有研究結(jié)果表明，基因調(diào)控與成釉細(xì)胞瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，針對(duì)其主要調(diào)控基因進(jìn)行研究，有望在理論認(rèn)識(shí)上產(chǎn)生突破。同源異型盒基因是調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育的主控基因，在牙胚發(fā)育中起關(guān)鍵作用，本課題旨在探索同源異型盒基因?qū)Τ捎约?xì)胞瘤發(fā)生發(fā)展的影響，以期發(fā)現(xiàn)有價(jià)值的基因，拓寬對(duì)該腫瘤的認(rèn)識(shí)，同時(shí)利用維甲酸進(jìn)行誘導(dǎo)分化

2、治療，為深入認(rèn)識(shí)該疾病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制及治療探索，提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：設(shè)計(jì)含同源異型盒基因家族的oligo芯片，篩選出成釉細(xì)胞瘤較帽狀期／鐘狀期牙胚中差異表達(dá)基因。針對(duì)候選基因設(shè)計(jì)引物，在14例臨床標(biāo)本和3例牙胚組織中驗(yàn)證表達(dá)差異結(jié)果。原代培養(yǎng)成釉細(xì)胞瘤細(xì)胞，觀察其形態(tài)及生長(zhǎng)情況，作特異性抗體檢測(cè)。用全反式維甲酸誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化，采用光學(xué)顯微鏡、透射電鏡、MTT、流式細(xì)胞儀、免疫組化，檢測(cè)腫瘤細(xì)胞形態(tài)，增殖指數(shù)，生長(zhǎng)抑

3、制率，細(xì)胞周期，凋亡指數(shù)的變化，最后應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)目的基因的表達(dá)變化。 結(jié)果：基因芯片篩選出73個(gè)差異表達(dá)基因，其中上調(diào)基因11個(gè)，下調(diào)基因62個(gè)，12個(gè)在四張芯片中共表達(dá)下調(diào)。選擇下調(diào)最顯著的HOXD8和DPRX基因作為目的基因(分別下調(diào)16，24.4倍)，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，在腫瘤組織中較牙胚低表達(dá)8.8，10.9倍。原代培養(yǎng)成釉細(xì)胞瘤細(xì)胞，可以保持腫瘤形態(tài)三代，持續(xù)28天，免疫組化顯示角蛋白18、19，

4、bcl-2表達(dá)陽(yáng)性，波形蛋白表達(dá)陰性。維甲酸誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化，濃度10<'-6>mol/L組作用5天效果最好，細(xì)胞形態(tài)有所改變，增殖活性下降，生長(zhǎng)抑制率31％，S期細(xì)胞減少，靜止期細(xì)胞增多，同時(shí)凋亡細(xì)胞明顯增多，從8.7％上升到39.3％。透射電鏡觀察瘤細(xì)胞形態(tài)向正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化，糖原減少，微絲增多，HOXD8和DPRX基因?qū)崟r(shí)表達(dá)檢測(cè)，分別升高18倍和13倍。 結(jié)論：同源異型盒基因家族在成釉細(xì)胞瘤中有眾多成員表達(dá)異常，下調(diào)基因遠(yuǎn)多

5、于上調(diào)基因，其中．HOXD8和DPRX基因下調(diào)程度最為突出。維甲酸誘導(dǎo)分化可以改變瘤細(xì)胞生物學(xué)性狀，使之向正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中HOXD8和DPRX基因表達(dá)明顯上調(diào)，表明這兩個(gè)基因與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，并發(fā)揮重要作用。家族其它成員也可能共同發(fā)揮協(xié)調(diào)作用。不同位置的HOX基因表達(dá)失調(diào)，造成牙胚發(fā)育過(guò)程中，上皮退化障礙可能是腫瘤發(fā)生的機(jī)制，并維持著腫瘤的發(fā)展方向。研究結(jié)果為進(jìn)一步明確成釉細(xì)胞瘤發(fā)病機(jī)制，探索新的治療方法開(kāi)拓了思路，同時(shí)