同源異型盒基因與成釉細胞瘤發(fā)生發(fā)展及誘導(dǎo)分化的研究.pdf

1、目的：成釉細胞瘤是最常見的牙源性腫瘤，好發(fā)于下頜骨，具有浸潤性生長特性，主要來源于牙胚發(fā)育中未退化的牙源性上皮，目前對其發(fā)生發(fā)展機制還不清楚?，F(xiàn)有研究結(jié)果表明，基因調(diào)控與成釉細胞瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，針對其主要調(diào)控基因進行研究，有望在理論認識上產(chǎn)生突破。同源異型盒基因是調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育的主控基因，在牙胚發(fā)育中起關(guān)鍵作用，本課題旨在探索同源異型盒基因?qū)Τ捎约毎霭l(fā)生發(fā)展的影響，以期發(fā)現(xiàn)有價值的基因，拓寬對該腫瘤的認識，同時利用維甲酸進行誘導(dǎo)分化

2、治療，為深入認識該疾病的發(fā)生發(fā)展機制及治療探索，提供新的思路和實驗依據(jù)。 方法：設(shè)計含同源異型盒基因家族的oligo芯片，篩選出成釉細胞瘤較帽狀期／鐘狀期牙胚中差異表達基因。針對候選基因設(shè)計引物，在14例臨床標(biāo)本和3例牙胚組織中驗證表達差異結(jié)果。原代培養(yǎng)成釉細胞瘤細胞，觀察其形態(tài)及生長情況，作特異性抗體檢測。用全反式維甲酸誘導(dǎo)腫瘤細胞分化，采用光學(xué)顯微鏡、透射電鏡、MTT、流式細胞儀、免疫組化，檢測腫瘤細胞形態(tài)，增殖指數(shù)，生長抑

3、制率，細胞周期，凋亡指數(shù)的變化，最后應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測目的基因的表達變化。 結(jié)果：基因芯片篩選出73個差異表達基因，其中上調(diào)基因11個，下調(diào)基因62個，12個在四張芯片中共表達下調(diào)。選擇下調(diào)最顯著的HOXD8和DPRX基因作為目的基因(分別下調(diào)16，24.4倍)，通過實時熒光定量PCR檢測，在腫瘤組織中較牙胚低表達8.8，10.9倍。原代培養(yǎng)成釉細胞瘤細胞，可以保持腫瘤形態(tài)三代，持續(xù)28天，免疫組化顯示角蛋白18、19，

4、bcl-2表達陽性，波形蛋白表達陰性。維甲酸誘導(dǎo)腫瘤細胞分化，濃度10<'-6>mol/L組作用5天效果最好，細胞形態(tài)有所改變，增殖活性下降，生長抑制率31％，S期細胞減少，靜止期細胞增多，同時凋亡細胞明顯增多，從8.7％上升到39.3％。透射電鏡觀察瘤細胞形態(tài)向正常細胞轉(zhuǎn)化，糖原減少，微絲增多，HOXD8和DPRX基因?qū)崟r表達檢測，分別升高18倍和13倍。 結(jié)論：同源異型盒基因家族在成釉細胞瘤中有眾多成員表達異常，下調(diào)基因遠多

5、于上調(diào)基因，其中．HOXD8和DPRX基因下調(diào)程度最為突出。維甲酸誘導(dǎo)分化可以改變瘤細胞生物學(xué)性狀，使之向正常細胞轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化的細胞中HOXD8和DPRX基因表達明顯上調(diào)，表明這兩個基因與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，并發(fā)揮重要作用。家族其它成員也可能共同發(fā)揮協(xié)調(diào)作用。不同位置的HOX基因表達失調(diào)，造成牙胚發(fā)育過程中，上皮退化障礙可能是腫瘤發(fā)生的機制，并維持著腫瘤的發(fā)展方向。研究結(jié)果為進一步明確成釉細胞瘤發(fā)病機制，探索新的治療方法開拓了思路，同時