鼠巨細(xì)胞病毒性耳聾小鼠蝸神經(jīng)核細(xì)胞凋亡的初步研究.pdf

1、目的：顱內(nèi)接種小鼠巨細(xì)胞病毒(murine cytomegalovirus，MCMV)，建立MCMV感染-聽(tīng)力損傷的BALB/C小鼠動(dòng)物模型，通過(guò)觀察蝸神經(jīng)核神經(jīng)元形態(tài)的改變以及比較腦干聽(tīng)覺(jué)誘發(fā)電位(auditory brainstem response，ABR)Ⅰ波閾值、蝸神經(jīng)核細(xì)胞[Ca2+]i/鈣調(diào)素及線(xiàn)粒體膜電位的變化來(lái)探討巨細(xì)胞病毒感染導(dǎo)致蝸神經(jīng)核細(xì)胞凋亡從而引起聽(tīng)力損傷的機(jī)制，為今后進(jìn)一步的研究和臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

2、>　　方法：將新生(出生24h內(nèi))BALB/C小鼠隨機(jī)分成兩組：實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組采用顱內(nèi)注射MCMV法(接種部位注射TCID50為104.31/0.1ml的MCMV病毒懸液20μl)建立MCMV感染-聽(tīng)力損傷模型，對(duì)照組用同樣的注射方法注射生理鹽水20μl觀察小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育和存活情況，在感染后1月分別用不同的方法測(cè)定：(1)在聲電屏蔽下檢測(cè)小鼠ABRⅠ波閾值；(2)通過(guò)光鏡觀察蝸神經(jīng)核細(xì)胞數(shù)目形態(tài)的大體變化，透射電鏡觀察MCMV感

3、染后小鼠蝸神經(jīng)核細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變。(3)以β-actin為內(nèi)參，RT-PCR方法檢測(cè)小鼠蝸神經(jīng)核細(xì)胞內(nèi)鈣調(diào)素(CaMmRNA)的表達(dá)：(4)流式細(xì)胞儀測(cè)定蝸神經(jīng)核細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i、線(xiàn)粒體膜電位的熒光強(qiáng)度；
　　結(jié)果：(1)對(duì)照組的小鼠生長(zhǎng)發(fā)育良好(皮毛光滑，反應(yīng)靈敏，活動(dòng)好)；實(shí)驗(yàn)組的小鼠生長(zhǎng)發(fā)育緩慢(皮毛凌亂稀疏、睜眼延遲、反應(yīng)略遲鈍、活動(dòng)差、體態(tài)略消瘦)：(2)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組小鼠相比ABRⅠ波閾值升高(P<0.05)，差

4、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)光鏡下實(shí)驗(yàn)組小鼠蝸神經(jīng)核中的神經(jīng)元數(shù)目減少，間隙水腫，有的神經(jīng)元僅留有輪廓，細(xì)胞核濃縮，出現(xiàn)凋亡小體，有明顯的凋亡現(xiàn)象。電鏡下實(shí)驗(yàn)組小鼠蝸神經(jīng)核中神經(jīng)元細(xì)胞腫脹、細(xì)胞膜不完整，出現(xiàn)核固縮，深染等細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，并找到病毒顆粒及凋亡小體；一些重要的細(xì)胞器如線(xiàn)粒體，高爾基體等結(jié)構(gòu)遭到破壞。對(duì)照組小鼠蝸神經(jīng)核中神經(jīng)元均無(wú)上述表現(xiàn)。(4)實(shí)驗(yàn)組小鼠與對(duì)照組相比蝸神經(jīng)核中鈣調(diào)素CaMmRNA的表達(dá)量明顯增多(P<0.05)，差