腺病毒介導(dǎo)hVEGF165基因轉(zhuǎn)染對(duì)移植的大鼠胰島再血管化及其生物學(xué)功能的影響.pdf

1、本課題研究的目的:觀察轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)基因?qū)σ浦驳慕幌荡笫笠葝u的再血管化程度和生物學(xué)功能的影響.方法:首先構(gòu)建攜帶血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165(hVEGF165)基因的重組腺病毒載體AdhVEGF165;然后用其轉(zhuǎn)染新鮮分離、純化的大鼠胰島,檢測(cè)在體外培養(yǎng)的條件下胰島表達(dá)hVEGF165的情況;最后,將經(jīng)AdhVEGF165轉(zhuǎn)染的Lweis大鼠胰島經(jīng)門靜脈移植至同基因大鼠的肝臟內(nèi),根據(jù)對(duì)供體胰島的不同處理將接受胰島移植的糖尿

2、病受體大鼠分三組,即AdhVEGF165轉(zhuǎn)染組(VEGF組)、空載體AdGFP轉(zhuǎn)染的對(duì)照組(GFP組)和未轉(zhuǎn)染的空白對(duì)照組(PBS組).移植后監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血糖的變化;三周以后進(jìn)行經(jīng)靜脈糖耐量試驗(yàn)(IVGTT),檢測(cè)增加糖負(fù)荷后不同組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血中胰島素水平的差異:對(duì)受體動(dòng)物的肝臟進(jìn)行病理學(xué)檢查,應(yīng)用CD34抗體、胰島素抗體行免疫組化研究,分析不同組動(dòng)物肝臟內(nèi)胰島的再血管化程度及其產(chǎn)生胰島素功能的差異.結(jié)果:體內(nèi)實(shí)驗(yàn)(Miles試驗(yàn))和體外

3、實(shí)驗(yàn)均證實(shí)經(jīng)AdhVEGF165轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞/大鼠胰島可以表達(dá)標(biāo)記蛋白GFP(綠色熒光蛋白)和hVEGF165,其表達(dá)hVEGF165的量顯著高于對(duì)照組;過表達(dá)hVEGF165的胰島在同基因移植后其再血管化的程度高于對(duì)照組胰島;在機(jī)體糖負(fù)荷增加的情況下,過表達(dá)hVEGF165的胰島使受體動(dòng)物血糖下降的速度加快,其產(chǎn)生、分泌胰島素的量高于對(duì)照組.結(jié)論:過表達(dá)hVEGF165的大鼠胰島在同基因移植后再血管化的程度提高,其維持糖尿病