基于真皮成纖維誘導(dǎo)條件下胃癌細(xì)胞BGC-823的轉(zhuǎn)化現(xiàn)象及其機(jī)制.pdf

1、1.研究背景:
　　腫瘤轉(zhuǎn)移是威脅人類健康的第一大問題，90％以上的腫瘤病人死于腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。多數(shù)患者在初診時并未出現(xiàn)明顯的腫瘤轉(zhuǎn)移，隨著腫瘤的進(jìn)展而出現(xiàn)腫瘤的轉(zhuǎn)移，但目前對腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)機(jī)制仍在探索中。
　　目前已經(jīng)明確，腫瘤細(xì)胞通過外滲作用進(jìn)入周圍組織是腫瘤轉(zhuǎn)移的首要條件。進(jìn)入組織中的腫瘤細(xì)胞首先與細(xì)胞外基質(zhì)直接接觸，它會受到正常組織內(nèi)的細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)的影響而發(fā)生轉(zhuǎn)變，同時，細(xì)胞-細(xì)胞、細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用共同調(diào)

2、節(jié)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為，包括細(xì)胞增殖、表型、分泌等，因此，我們認(rèn)為正常的成纖維細(xì)胞在腫瘤發(fā)生及進(jìn)展過程起關(guān)鍵作用。
　　成纖維細(xì)胞是細(xì)胞外基質(zhì)中主要細(xì)胞。成纖維細(xì)胞不僅可以提供從細(xì)胞外微環(huán)境的刺激，還可通過旁分泌途徑分泌大量的細(xì)胞因子。研究指出腫瘤相關(guān)的成纖維細(xì)胞與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，然而正常的成纖維細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的作用一直存在爭議。正常成纖維細(xì)胞抑制永生化的前列腺上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。而在乳腺癌中，成纖維細(xì)胞促進(jìn)了導(dǎo)管內(nèi)癌轉(zhuǎn)變?yōu)榻?/p>

3、癌。而實(shí)驗(yàn)方法的不同可能是導(dǎo)致差異結(jié)果的一個原因。
　　在實(shí)驗(yàn)中，我們通過將胃癌細(xì)胞BGC-823s與正常的成纖維細(xì)胞進(jìn)行體外共同培養(yǎng)以模擬體內(nèi)腫瘤細(xì)胞與正常成纖維細(xì)胞的相互作用，我們發(fā)現(xiàn)，正常成纖維細(xì)胞可將胃癌BGC-823s誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化為散在的短梭形細(xì)胞，該細(xì)胞生物學(xué)行為與BGC-823截然不同，包括增殖、侵襲、遷移、轉(zhuǎn)移和化療敏感性。動物實(shí)驗(yàn)中，我們證實(shí)該細(xì)胞成瘤能力明顯減低，但轉(zhuǎn)移能力卻增強(qiáng)，尤其是淋巴轉(zhuǎn)移能力，我們初步研究發(fā)

4、現(xiàn)該群細(xì)胞E-鈣粘素顯著下調(diào)，證實(shí)該細(xì)胞具有上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)的特性。
　　2.實(shí)驗(yàn)方法:
　　2.1正常成纖維細(xì)胞與胃癌細(xì)胞BGC-823長期共觀察腫瘤細(xì)胞大體變化;
　　2.2通過不同熒光素標(biāo)記成纖維細(xì)胞及BGC-823，并進(jìn)行體外及體內(nèi)示蹤;
　　2.3通過細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)檢測BGC-823細(xì)胞增殖能力，通過遷移和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力，通過侵襲實(shí)驗(yàn)和三維培養(yǎng)檢測細(xì)胞侵襲能力，并通過藥物抑制實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞

5、凋亡檢測腫瘤細(xì)胞對順鉑和5-FU藥物化療敏感性;
　　2.4通過實(shí)時熒光定量PCR，蛋白凝膠電泳及細(xì)胞免疫熒光方法觀察轉(zhuǎn)化后的BGC-823細(xì)胞內(nèi)E-鈣粘素表、波型蛋白、β-連環(huán)蛋白和N-鈣粘素表達(dá)情況，并與未轉(zhuǎn)化的BGC-823細(xì)胞對照;
　　2.5將腫瘤細(xì)胞通過鼠尾靜脈注射建立靜脈注射模型觀察兩組腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)分布的差異;
　　2.6通過皮下注射腫瘤細(xì)胞建立皮下種植模型觀察腫瘤細(xì)胞成瘤能力和轉(zhuǎn)移能力;
　　2

6、.7通過熒光示蹤方法觀察早期腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)的情況;
　　2.8通過免疫組化的方法觀察各個時間點(diǎn)淋巴結(jié)中E-鈣粘素表和β-鏈蛋白表達(dá)情況。
　　3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　3.1正常成纖維細(xì)胞與胃癌細(xì)胞BGCs在體外多次長期共培養(yǎng)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞形成散在分布的短梭形細(xì)胞TBGCs;
　　3.2誘導(dǎo)后的腫瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力增強(qiáng)，對順鉑的敏感性明顯降低;
　　3.3 TBGCs中E-鈣粘素表達(dá)顯著下降，而波型蛋白、β

7、-連環(huán)蛋白和N-鈣粘素表達(dá)升高，提示腫瘤細(xì)胞在長期高密度成纖維細(xì)胞作用下可能發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化;
　　3.4靜脈注射模型中，TBGCs組裸鼠早期即出現(xiàn)淋巴和腸道轉(zhuǎn)移能力;而BGCs組裸鼠則以肺臟轉(zhuǎn)移為主;
　　3.5皮下致瘤模型中TBGCs組裸鼠基本無成瘤能力，表現(xiàn)為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng);
　　4.研究結(jié)論:
　　正常成纖維細(xì)胞可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞BGC-823s通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等機(jī)制轉(zhuǎn)化為新的細(xì)胞:TBGCs。這種細(xì)胞成