地西他濱序貫聯(lián)合去甲氧柔紅霉素通過協(xié)同抑制wnt-α-catenin通路抗急性髓系白血病的體外研究.pdf

1、第一部分：篩選與DAC聯(lián)合效果最佳的藥物和聯(lián)合方式
　　 目的：篩選與DAC聯(lián)合效果最佳的藥物和聯(lián)合方式
　　 方法：將IDA、DNR、ACLA、THAL以及HHT分別與DAC進(jìn)行同時(shí)或序貫聯(lián)合作用于U937細(xì)胞株，通過四唑鹽比色試驗(yàn)(MTT)檢測(cè)U937細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制情況，并采用Calcusyn軟件計(jì)算其聯(lián)合指數(shù)分析其聯(lián)合效應(yīng)。進(jìn)一步用基因芯片技術(shù)分析與兩藥協(xié)同效應(yīng)相關(guān)信號(hào)通路。
　　 結(jié)果：HHT、THAI、

2、ACLA及DNR與DAC聯(lián)合無協(xié)同抗AML作用，CI指數(shù)都大于0.8；而DAC與IDA序貫聯(lián)合能協(xié)同抑制AML細(xì)胞的生長(zhǎng)，CI聯(lián)合指數(shù)小于0.8。
　　 結(jié)論：DAC與IDA進(jìn)行序貫聯(lián)合作用U937細(xì)胞株時(shí)協(xié)同效果最佳。
　　 第二部份：研究DAC與IDA協(xié)同抗白血病作用的機(jī)制
　　 目的：研究DAC與IDA協(xié)同抗白血病作用的機(jī)制
　　 方法：用DAC與IDA序貫聯(lián)合作用HEL和SKM-1細(xì)胞株，再采用M

3、TT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況，同時(shí)用Calcusyn軟件計(jì)算其聯(lián)合指數(shù)分析其聯(lián)合效應(yīng)；用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定DAC與IDA序貫聯(lián)合作用U937、HEL、SKM-1細(xì)胞株前后細(xì)胞的凋亡情況；用甲基化特異性PCR測(cè)定U937、HEL、SKM-1細(xì)胞株的Wnt信號(hào)通路相關(guān)抑制基因如DKK3、HDPR1、SFRP1甲基化情況；用RT-PCR測(cè)定藥物作用前后白血病細(xì)胞中Wnt信號(hào)通路抑制基因如DKK3、HDPR1、SFRP1和Wnt經(jīng)典通路相關(guān)基因如β-

4、catenin、C-MYC、CyclinD1的mRNA表達(dá)變化情況；用WesternBlot法測(cè)定藥物作用前后細(xì)胞中Wnt信號(hào)通路抑制基因如DKK3、HDPR1、SFRP1和WNT經(jīng)典通路相關(guān)基因如β-catenin、C-MYC、CyclinD1蛋白表達(dá)變化情況。
　　 結(jié)果：(1)DAC和IDA均能抑制急性髓系白血病細(xì)胞株SKM-1和HEL細(xì)胞的生長(zhǎng)，序貫聯(lián)合時(shí)抑制作用優(yōu)于單藥，表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)；(2)DAC和IDA序貫聯(lián)合抑制

5、U937、HEL和SKM-1細(xì)胞株生長(zhǎng)是通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)的，而序貫聯(lián)合作用時(shí)凋亡率要優(yōu)于單藥；(3)U937、SKM-1和HEL細(xì)胞中Wnt抑制基因(DKK3，HDPR1，SFRP1)都存在不同程度的甲基化；(4)DAC和IDA序貫聯(lián)合可以使U937、SKM-1和HEL細(xì)胞中Wnt抑制基因(DKK3，HDPR1，SFRP1)的表達(dá)上調(diào)，并且序貫聯(lián)合時(shí)作用優(yōu)于單藥；(5)DAC和IDA序貫聯(lián)合可以使U937、SKM-1和HEL細(xì)胞中W