廣東省動物源沙門菌流行特點及HRM檢測雞白痢和雞傷寒沙門菌方法的建立.pdf

1、沙門菌是一種重要的人獸共患病原菌，目前，全球已鑒定出2500多種血清型，其中許多血清型對人、家畜和家禽等多種動物均有致病性，不僅給養(yǎng)殖業(yè)造成很大的危害，而且具有很重要的公共衛(wèi)生意義。動物源沙門菌能夠在不同動物和動物性食品中廣泛存在，是人和動物感染的重要來源，所以開展動物源沙門菌流行病學(xué)研究具有重要意義。廣東省是畜禽產(chǎn)品的生產(chǎn)和消費大省，畜禽產(chǎn)品的供應(yīng)和安全性直接關(guān)系到社會穩(wěn)定和人民群眾健康。目前對廣東地區(qū)動物源沙門菌流行情況和耐藥數(shù)據(jù)了

2、解不多。
　　為了掌握廣東省動物源沙門菌流行特點和耐藥情況，本研究在2015年從廣東省不同地區(qū)采集動物和動物性食品樣品415份（包括雞肉263份、豬肉128份和沙門菌感染病例24份），共分離到沙門菌273株，其中雞肉153株（分離率58.2％）、豬肉96株（分離率75.0%）和獸醫(yī)臨床分離24株；273株沙門菌共鑒定出28個血清型，雞肉中的沙門菌主要血清型為科瓦里斯、阿貢納和肯塔基，豬肉中主要血清型為鼠傷寒、德比和羅森，獸醫(yī)臨床中

3、主要血清型為鼠傷寒；藥敏試驗顯示，16種抗菌藥物中耐藥性最高的是四環(huán)素（76.2%），其次為磺胺異惡唑（48.0%）和氨芐西林（41.4%），且多重耐藥菌株（耐三類或三類以上抗菌藥物）占51.6%；對產(chǎn) ESBLs主要基因型（blaTEM、blaCTX-M和blaOXA）進(jìn)行檢測，29.3%的菌株至少攜帶一個產(chǎn)ESBLs基因；采用PCR檢測Ⅰ型整合酶活性，33.7%檢測到整合酶活性，但只有9.5%擴(kuò)增到整合子基因盒，基因盒總共檢測到六類

4、，其中 aadA2-dfrA12檢出率最高，說明廣東省動物源沙門菌Ⅰ型整合子在氨基糖苷藥物和磺胺類藥物的耐藥基因傳播中起著重要作用。
　　鑒于雞白痢沙門菌和雞傷寒沙門菌是危害家禽最主要的沙門菌，目前的常規(guī)檢測方法很難對其進(jìn)行鑒別診斷。本研究通過測序比對結(jié)合文獻(xiàn)報道，發(fā)現(xiàn)雞白痢和雞傷寒沙門菌rfbS基因在237位點和598位點有規(guī)律性的變化。在此基礎(chǔ)上使用自行設(shè)計的引物對SP-237F/237R和 SG-598F/598R成功建立了

5、高分辨熔解曲線檢測方法（PCR-HRM），該方法特異性為100%，最低檢測限分別為34 copies/μL和42 copies/μL，靈敏度是普通PCR的100倍以上。該方法操作簡便，檢測時只需要在PCR反應(yīng)中加入飽和熒光染料，簡化了臨床檢驗的流程并且大大縮短了檢測時間，并且該方法具有高通量、高效率的特點，一次最多可以檢驗384個樣本。與傳統(tǒng)PCR后電泳開放操作相比，本方法從PCR過程到HRM分析一步完成，實現(xiàn)了真正的閉管操作，解決了傳