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文檔簡介
1、本試驗(yàn)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增了標(biāo)準(zhǔn)血清2型RA的42KDa外膜蛋白基因片段(OmpA-2)1045bp，與原核表達(dá)載體pGEX-4T-1連接構(gòu)建重組表達(dá)載體，轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21菌株中，在1mM的IPTG誘導(dǎo)下，表達(dá)融合蛋白，誘導(dǎo)后5h蛋白表達(dá)量達(dá)到高峰。融合表達(dá)蛋白GST-OmpA1-2的分子量約為65KDa，以包涵體形式存在?！ ∫悦撗跄懰徕c(DOC)洗滌包涵體，然后用N-十二烷基肌氨酸鈉(SKL)溶解，將溶解包涵體進(jìn)行透析復(fù)性。分別
2、用親和層析法、電洗脫法和研磨法對GST-OmpA1-2融合蛋白進(jìn)行了純化，親和層析純化效果不佳，電洗脫法和研磨法則獲得了較好的純化效果?！ ST-OmpA1-2融合表達(dá)蛋白免疫鴨，采血分離血清。GST-OmpA1-2以0.85μg/mL的濃度包被酶標(biāo)反應(yīng)板，鴨抗2型RA陽性血清進(jìn)行200×稀釋，HRP-山羊抗鴨IgG作5000×稀釋，建立間接ELISA方法檢測免疫鴨的抗體水平。間接ELISA和Western-blotting試驗(yàn)結(jié)
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