牛結(jié)核分支桿菌外膜蛋白OMP37、OMP12基因的克隆表達(dá)及免疫活性檢測(cè).pdf

1、牛結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的一種人獸共患傳染病。人畜結(jié)核病的交叉?zhèn)鞑ナ窃斐山Y(jié)核病廣泛流行的重要原因之一。由于牛與人類關(guān)系密切，致使人類結(jié)核病的lO％以上是由牛分枝桿菌引起的，所以，牛結(jié)核的存在嚴(yán)重威脅著人類的健康。本病的傳播流行直接影響著畜收業(yè)的發(fā)展，而且還會(huì)通過(guò)各種途徑傳染給人。因此，采取必要措施防治結(jié)核病已是勢(shì)在必行。自上世紀(jì)90年代以來(lái)，人結(jié)核病呈世界范圍性的回升，每年死亡人數(shù)達(dá)300萬(wàn)，屬各類傳染病死亡人數(shù)之首，創(chuàng)近年來(lái)歷史最

2、高記錄。專家們估計(jì)，至2005年，結(jié)核病死亡人數(shù)將超過(guò)500萬(wàn)。我國(guó)現(xiàn)有結(jié)核病人600萬(wàn)，是世界上22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)的國(guó)家之一，加之人口的流動(dòng)，結(jié)核多重耐藥菌株(MDR)的出現(xiàn)，與艾滋病的合并感染，以及多種社會(huì)經(jīng)濟(jì)因素造成了診斷和治療上的巨大困難，嚴(yán)重影響到結(jié)核病的控制。因此，結(jié)核病成為人們關(guān)注的公共健康問(wèn)題。為了紀(jì)念Kock1882年3月24日發(fā)現(xiàn)結(jié)核桿菌，世界衛(wèi)生組織決定從1996年起將每年的3月24日定為結(jié)核病防制日，以警鐘長(zhǎng)鳴。

3、WHO指出：“在存在牛結(jié)核的國(guó)家中，人類始終受到它的威脅，除非著手消滅牛結(jié)核病，否則，人類結(jié)核病的控制是不會(huì)成功的”。目前，一些較發(fā)達(dá)的國(guó)家和地區(qū)，如美國(guó)、澳大利亞、北歐等已基本消滅了牛結(jié)核病，但由于人結(jié)核病和野生動(dòng)物結(jié)核病的存在，致使這些國(guó)家仍對(duì)牛結(jié)核處于不斷的檢疫和高度的警惕之中。在廣大的發(fā)展中國(guó)家，該病仍嚴(yán)重的流行。但是，近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)的發(fā)展和應(yīng)用，對(duì)牛分枝桿菌的基因序列及其主要功能以及發(fā)病機(jī)理和免疫機(jī)制等都有了新

4、的認(rèn)識(shí)和了解，這些均將有利于結(jié)核病的防治。 近年來(lái)，牛結(jié)核病的診斷方法逐漸得到完善，并且找到了很多結(jié)核分支桿菌的特異性抗原及其基因。將傳統(tǒng)細(xì)菌檢驗(yàn)方法免疫學(xué)方法和分子生物學(xué)的方法相結(jié)合，加速了對(duì)牛結(jié)核病的診斷的研究。特別是分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對(duì)于闡明牛分支桿菌和結(jié)核分支桿菌的遺傳變異規(guī)律及分子進(jìn)化等方面都有重要的流行病學(xué)意義。 細(xì)菌的外膜蛋白為一組位于菌體表面的蛋白，具有潛在的免疫原性和保護(hù)性抗原的作用。本試驗(yàn)以牛結(jié)核

5、分支桿菌基因組為模板，擴(kuò)增外膜蛋白OMP37和OMP12基因全長(zhǎng)，獲得1008bp和330bp大小的基因片段。將這兩段片段直接克隆于原核表達(dá)載體PGEX-4T-2，成功構(gòu)建陽(yáng)性重組表達(dá)載體。IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后，經(jīng)SDS-PAGE和Western-blotting檢測(cè)，結(jié)果在大腸桿菌中成功表達(dá)出63KDa的外膜蛋白OMP37和38KDa的外膜蛋白OMP12，并且這兩種蛋白都能與牛結(jié)核分支桿菌病臨床陽(yáng)性動(dòng)物血清產(chǎn)生特異性結(jié)合反應(yīng)，具有良好的