鰻弧菌鐵調(diào)節(jié)外膜蛋白的免疫效果及五種致病性弧菌鐵調(diào)節(jié)外膜蛋白表達(dá)的研究.pdf

1、本試驗(yàn)分為兩部分，第一部分針對(duì)海水魚類養(yǎng)殖過程中常見的致病性鰻弧菌株L-18株，考察其在限鐵條件下的生長情況及鐵載體、鐵調(diào)節(jié)外膜蛋白(IROMP)的表達(dá)，并比較全菌疫苗、外膜蛋白(OMP)和IROMP的免疫效果，為從鐵攝取系統(tǒng)方面研發(fā)新型疫苗提供參考；第二部分研究了五種常見致病性弧菌鰻弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、哈維氏弧菌和河流弧菌的限鐵生長條件，并比較了其鐵調(diào)節(jié)外膜蛋白表達(dá)的差異，為研究其鐵攝取系統(tǒng)的交叉反應(yīng)及交叉保護(hù)，進(jìn)而研制可能的

2、多價(jià)或聯(lián)合疫苗提供數(shù)據(jù)。免疫部分的試驗(yàn)在中國水產(chǎn)科學(xué)院黃海水產(chǎn)研究所麥島試驗(yàn)基地進(jìn)行。 1.以一株從患病牙鲆體內(nèi)分離到的鰻弧菌L-18株作為研究對(duì)象，考察了其在限鐵培養(yǎng)條件下的鐵攝取系統(tǒng)的表達(dá)，通過免疫印跡試驗(yàn)考察了IROMPs的免疫原性，并通過主動(dòng)免疫比較了全菌滅活疫苗、OMPs、IROMPs對(duì)牙鲆的免疫保護(hù)力。結(jié)果表明，在TSB培養(yǎng)基中加入不同濃度的2,2'-聯(lián)吡啶，L-18株的生長表現(xiàn)出一定的規(guī)律；驗(yàn)證了兒茶酚類鐵載體和7

3、4.3ku、77.4ku IROMPs的表達(dá)；免疫印跡試驗(yàn)表明，77.4ku IROMPs具有免疫原性；免疫牙鲆的試驗(yàn)結(jié)果表明，各疫苗的免疫保護(hù)力為：全菌疫苗79.3％，OMPs疫苗51.8％，IROMPs疫苗75.9％，IROMPs的免疫保護(hù)力顯著高于OMPs。雖然IROMPs與OMPs的血清殺菌活力沒有顯著差異，但其抗體效價(jià)卻顯著高于OMPs。因此，鰻弧菌L-18株的IROMPs是一種良好的免疫原，能夠顯著提高OMPs的免疫保護(hù)力，

4、可能成為一種新型高效的疫苗。 2.考察了五種致病性弧菌：鰻弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、哈維氏弧菌和河流弧菌的適宜的限鐵生長條件，以及所表達(dá)IROMPs的異同。結(jié)果表明，以TSB+2,2'-聯(lián)吡啶為限鐵培養(yǎng)基，各種弧菌的適宜限鐵生長條件有較大差異，其對(duì)2,2'-聯(lián)吡啶的要求是：鰻弧菌為100～130 μmol·L<'-1>，副溶血弧菌250 μmol·L<'-1>，溶藻弧菌150μmol.L<'-1>，哈維氏弧菌130μmol·L

5、<'-1>，河流弧菌150μmol·L<'-1>。五種弧菌在限鐵條件下，均可表達(dá)各自的IROMPs：鰻弧菌表達(dá)出74.3ku、77.4ku IROMPs； 鰻弧菌鐵調(diào)節(jié)外膜蛋白的免疫效果及五種致病性弧菌鐵調(diào)節(jié)外膜蛋白表達(dá)的研究副溶血弧菌是68.4ku、71.2ku、72.9ku、74.3ku、77.0ku數(shù)種蛋白的加強(qiáng)表達(dá)；溶藻弧菌是70.4ku、72.9ku、74.5ku和77.0ku數(shù)種蛋白的加強(qiáng)表達(dá)，并表達(dá)出新的81.1k

6、u和84.8ku蛋白；哈維氏弧菌新增表達(dá)了82.0ku和83.6ku蛋白；河流弧菌新增表達(dá)了77.4ku和82.7ku蛋白。參照電泳圖譜，五種弧菌的IROMPs都出現(xiàn)在約70.4ku～84.8ku的范圍內(nèi)，并且某些蛋白帶具有一定的相似性，比如鰻弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌都表達(dá)了約74.5ku和77.0ku的蛋白；另外溶藻弧菌、哈維氏弧菌和創(chuàng)傷弧菌都新增表達(dá)了約81.1ku-82.7ku。的蛋白，不排除相似分子量的蛋白就是一種蛋白的可能。

7、能否據(jù)此推測某些弧菌利用相同的蛋白攝取鐵，進(jìn)而利用此點(diǎn)開發(fā)針對(duì)弧菌的高效多價(jià)疫苗，還有大量的工作要做。 本文在前人對(duì)鰻弧菌IROMPs結(jié)構(gòu)和特性的研究基礎(chǔ)上，首次考察了鰻弧菌IROMPs的免疫效果，發(fā)現(xiàn)其免疫效果與OMPs相比有大幅度提高；首次從同屬內(nèi)種間差異角度對(duì)五種弧菌的IROMPs進(jìn)行了比較，并發(fā)現(xiàn)了其異同之處。本文填補(bǔ)了弧菌IROMPs的免疫效果領(lǐng)域的空白，為開發(fā)新型漁用弧菌病疫苗提供一種思、路，并為研究數(shù)種弧菌很可能存