布魯氏菌外膜蛋白的原核表達和鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、布魯氏菌外膜蛋白位于細菌細胞膜的最外層，部分外膜蛋白具有免疫原性和抗原保護作用。本研究的目的是克隆并表達馬爾他布魯氏菌部分外膜蛋白，并檢測所表達外膜蛋白的免疫原性。通過分析布魯氏菌的膜相關蛋白，從中選出27個分泌蛋白和跨膜蛋白，利用PCR擴增方法獲得目的基因、凝膠回收試劑盒回收純化目的片段，然后與酶切回收的表達載體pGEX-4T-2連接構建重組表達質粒，轉化BL21感受態(tài)細胞，并通過酶切分析、PCR擴增和序列測定分析鑒定重組質粒，結果表

2、明成功構建25個重組表達載體，成功轉化并獲得22個轉化菌株，而且重組質粒中攜帶的目的基因編碼框完全正確。將構建好的融合表達載體在不同濃度的IPTG誘導下在大腸桿菌BL2l中進行表達，通過不斷改變誘導時機和誘導溫度等條件，共成功誘導表達16個目的蛋白。用野外牛陽性血清進行Western-Blot免疫印跡分析，7個蛋白能夠表現(xiàn)出程度不同程度的陽性反應，表明該7個蛋白具有一定的反應原性。該研究為進一步篩選布魯氏菌病免疫診斷抗原以及蛋白功能研究

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