小麥全蝕病菌胞外β-1,3-葡聚糖酶Ⅱ的分離純化及性質研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、  小麥全蝕病是一種世界范圍內普遍發(fā)生的重要根部病害和重點防治對象,給小麥生產(chǎn)帶來重大的損失。由于全蝕病的致病機理研究還很薄弱,加之目前尚無有效的抗性品種和化學藥劑,全蝕病的防治仍是小麥生產(chǎn)中的一大難題?! ⌒←溔g病菌致病機理的研究顯示,病菌侵染麥根的過程,不僅與纖維素酶和木聚糖酶等細胞壁降解酶有關,還可能涉及胞外β-1,3-葡聚糖酶。因此,本研究小組對小麥全蝕病菌胞外β-1,3-葡聚糖酶進行了系統(tǒng)研究,其目的是為進一步全面揭示小麥

2、全蝕病菌致病過程的細胞化學和分子生物學機理奠定基礎,同時也為進一步開展抗全蝕病的生物工程研究提供理論依據(jù)。本論文在課題組前期工作的基礎上,對全蝕菌產(chǎn)生的胞外β-1,3-葡聚糖酶同工酶進行了分離純化和酶學性質研究,取得以下重要研究結果表明:  1.硫酸銨梯度沉淀研究發(fā)現(xiàn),55﹪飽和度的硫酸銨就基本可以將小麥全蝕病菌液體振蕩培養(yǎng)液中的目的蛋白全部析出?! ?.小麥全蝕病菌產(chǎn)生的胞外β-1,3-葡聚糖酶主要存在兩種同工酶(β-1,3-葡聚

3、糖酶Ⅰ和β-1,3-葡聚糖酶Ⅱ),并且β-1,3-葡聚糖酶Ⅱ的表達量相對較大,β-1,3-葡聚糖酶Ⅰ的表達量較小?! ?.粗酶液經(jīng)SephadexG-150凝膠過濾層析分離,出現(xiàn)兩個紫外光吸收峰,各收集部分酶活力也出現(xiàn)兩個主要吸收峰,根據(jù)各收集部分的酶活力大小及它們在層析圖譜上所出現(xiàn)的位置,證實粗酶液主要含有兩種β-1,3-葡聚糖酶同工酶?! ?.經(jīng)過非變性PAGE分離膠濃度的篩選,確定了達到兩種β-1,3-葡聚糖酶同工酶的最佳分離

4、效果的分離膠濃度為7.5﹪?! ?.電洗脫回收了經(jīng)非變性PAGE(分離膠濃度為7.5﹪、濃縮膠濃度為3.9﹪)分離的同工酶(表達量較大的GluⅡ),經(jīng)電泳檢測達到電泳純?! ?.β-1,3-葡聚糖酶Ⅱ由兩個亞基組成,它們的分子量分別為63.2KD和73.7KD。  7.β-1,3-葡聚糖酶Ⅱ的等電點為8.6?! ?.β-1,3-葡聚糖酶Ⅱ最適反應溫約為50℃,在<60℃時比較穩(wěn)定;最適反應pH值5.0左右,pH4.0~7.0較穩(wěn)

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