農(nóng)桿菌介導(dǎo)β-1，3-葡聚糖酶（BG2）基因轉(zhuǎn)化南瓜的研究.pdf

1、南瓜營(yíng)養(yǎng)豐富、用途廣泛，具有較高的食用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。黑龍江省籽用南瓜栽培面積年達(dá)到300萬畝，是國(guó)內(nèi)外重要的籽用南瓜產(chǎn)區(qū)。南瓜籽也是黑龍江省農(nóng)產(chǎn)品出口創(chuàng)匯產(chǎn)品之一。南瓜真菌病害的危害極大降低了南瓜的產(chǎn)量和品質(zhì)。南瓜疫病造成死秧爛瓜，個(gè)別多雨年份病害大流行可造成局部地區(qū)絕產(chǎn)。南瓜白粉病造成植株早衰而降低產(chǎn)量和影響籽粒飽滿度。常規(guī)抗病育種方法在南瓜的品種改良、選育等方面發(fā)揮了重要作用，但存在選育年限長(zhǎng)、耗資大、效率低及抗性種質(zhì)資源匱乏等問

2、題。近年來以導(dǎo)入目的基因創(chuàng)造新種質(zhì)的基因工程手段的應(yīng)用。為南瓜抗真菌病育種的選育開辟了一條新途徑。本試驗(yàn)以金輝一號(hào)南瓜為試材，建立了南瓜高頻再生體系，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)將抗真菌病基因β-1,3-葡聚糖酶(BG2)基因?qū)虢疠x一號(hào)南瓜中，并探討了影響其再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化效率的主要因素，確定了金輝一號(hào)南瓜最佳再生和遺傳轉(zhuǎn)化條件，為培育南瓜抗真菌病新品種奠定了基礎(chǔ)。研究的主要內(nèi)容和結(jié)果如下： (1)建立了金輝一號(hào)南瓜再生體系：最佳無菌苗萌

3、發(fā)培養(yǎng)基為0.8％瓊脂，接種方式為平放；最佳外植體來源為“兩片子葉呈直立狀態(tài)，顏色為綠色”的無菌苗；最佳外植體為1/2子葉節(jié)；最佳不定芽分化培養(yǎng)基為MS+1.0mg/L6-BA，芽伸長(zhǎng)培養(yǎng)基為MS+0.1mg/L6-BA+0.1mg/LGA3;最佳生根培養(yǎng)基為MS+0.1mg/LNAA。 (2)確定了抗生素篩選濃度：載體上含有NPTⅡ選擇標(biāo)記基因，使轉(zhuǎn)化植株帶有卡那霉素抗性，本試驗(yàn)進(jìn)行兩次篩選，確定芽分化階段卡那霉素篩選濃度為1