新型農(nóng)用抗生素SL103分離純化的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)室目前有一株從土壤中分離得到藤黃灰鏈霉菌(Streptomycesluteogriseus)，編號(hào)為099。該菌株能產(chǎn)生抗植物真菌病害的代謝物，命名為SL103，抗菌譜較廣。本實(shí)驗(yàn)室以前的工作排除了SL103為細(xì)胞多糖、蛋白質(zhì)或多肽的可能，并得知它是一種極性較強(qiáng)的小分子量的抗生素，但是還沒有得到純品，并且對(duì)其理化性質(zhì)也所知甚少，所以本文在抗立枯絲核菌活性指導(dǎo)下，嘗試探索利用吸附、離子交換、結(jié)晶和高壓液相色譜等多種分離手段對(duì)SL10

2、3進(jìn)行富集和分離，以得到純度較高的活性物質(zhì)，確定出較為合理的分離純化工藝路線和色譜檢測條件，并且對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行初步研究。 通過實(shí)驗(yàn)，篩選出適合吸附抗生素SL103的大孔吸附樹脂X-5；通過測定吸附速率曲線和穿透曲線，得知發(fā)酵液和樹脂吸附時(shí)的最佳體積比為10：1；確定最佳吸附pH值為7.0；不同濃度的甲醇溶液和乙醇溶液的洗脫實(shí)驗(yàn)表明，50％的乙醇溶液可以有效地將SL10從X-5樹脂柱上洗脫，而50％的甲醇溶液則可以有效地洗脫掉樹脂上

3、吸附的雜質(zhì)和色素。 吸附飽和后的X-5樹脂柱，先用去離子水沖洗，然后用50％的甲醇洗去雜質(zhì)和色素，再用50％的乙醇在4mL/min的流速下進(jìn)行洗脫，合并活性高的洗脫液，濃縮后靜置48h得到SL103的粗結(jié)晶；用HPLC-ELSD對(duì)結(jié)晶進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，此結(jié)晶純度較高，可達(dá)95％以上；經(jīng)過質(zhì)譜分析，得知其為一種小分子量的抗生素，分子量為662.5。 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)SL103沒有紫外吸收，所以決定采用ELSD作為HPLC所用

4、檢測器，并對(duì)具體色譜條件進(jìn)行了試驗(yàn)，得到了優(yōu)化的色譜條件。優(yōu)化后的色譜條件如下：反相色譜柱Agilent20RBA×310SB-C18(150mm×4.6mmi.d，5μm)，以乙腈(A)-水(B)為流動(dòng)相，梯度洗脫，0～4.0min,V(A)：V(B)=20：80，4.0～9.5min,V(A)：V(B)=45：55，此后V(A)：V(B)=80：20，流動(dòng)相流速：0.8mL/min，柱溫：30℃，ELSD條件：漂移管溫度115℃，載