15198.znf580在tgfβ誘導內(nèi)皮細胞表達enos中的作用研究

1、河北醫(yī)科大學學位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學位論文在導師(或指導小組)的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權(quán)對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學所有。否則，承擔相應的法律責任。，，∥：Z一薯。j一。／0。、!i‘!‘1研究生簽名：起捷導師簽章：歹移艾

2、玟害篆霉磊茹喜≥毒文j’bf輝。名月螃日、’、j，’吃：’i?！啊！ⅲ?河北醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注等內(nèi)容外，文中不包含其他人已發(fā)表或撰寫的研究成果，指導教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負。研究生簽As名：走瑛中文摘要ZNF580在TGF—p誘導內(nèi)皮細胞表達eNOS中的作用研究摘要ZNF580是由本課題組克隆的一種新的人C2H2型鋅指蛋白基因

3、，與Kmppel樣鋅指轉(zhuǎn)錄因子(KNppel1ikefactors，Klfs)家族成員類似，具有參與血管的形成和細胞內(nèi)信號的轉(zhuǎn)導等功能。而eNOS(內(nèi)皮型一氧化氮合酶)是維持內(nèi)皮細胞正常功能所必需的，對于血管的舒張具有很重要的意義。本實驗旨在探討ZNF580在TGFp誘導內(nèi)皮細胞表達eNOS中的作用機制。目的：以人臍靜脈內(nèi)皮細胞株(EAhy926)為體外模型，在轉(zhuǎn)化生長因子TGFB的作用下，研究人C2H2型鋅脂蛋白新基因ZNF580表達

4、情況，分析ZNF580基因表達與內(nèi)皮細胞穩(wěn)態(tài)相關(guān)因子eNOS之間的關(guān)系，以及ZNF580基因過表達和低表達對eNOS表達的影響，進一步揭示ZNF580在TGFD誘導內(nèi)皮細胞表達eNOS以及維持內(nèi)皮細胞穩(wěn)態(tài)中的作用。方法：①人臍靜脈內(nèi)皮細胞株(EAhy926)，用含10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基，在37。C、5％C02、飽和濕度下培養(yǎng)至EAhy926細胞生長成單層后備用。②利用LentiGFPZNF580和LentiRNAiZNF58

5、0瞬時轉(zhuǎn)染EAhy926內(nèi)皮細胞，獲得瞬時過表達和低表達ZNF580的EAhy926細胞。運用倒置熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率，定量PCR以及westemblot鑒定轉(zhuǎn)染后ZNF580和eNOS的表達情況。pGL3一control，pGL3eNOSLuc和p—gal質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染EAhy926細胞，單熒光素酶報告試驗檢測eNOS和ZNF580的變化趨勢是否一致。③胰酶消化收集對數(shù)生長期EAhy926細胞，將其懸浮于高糖DMEM細胞培養(yǎng)液中，濃度約