水牛GV期卵母細(xì)胞程序化冷凍研究.pdf

1、水牛繁殖存在許多問題,如性成熟較晚、發(fā)情不明顯、發(fā)情后期長(zhǎng)、受胎率低等.與黃牛相比,水牛胚胎生物技術(shù)相關(guān)研究較為滯后,文獻(xiàn)報(bào)道也相對(duì)較少.有關(guān)水牛胚胎的程序化冷凍有過成功的報(bào)道并產(chǎn)犢,但未見程序化冷凍水牛卵母細(xì)胞的報(bào)道.該實(shí)驗(yàn)旨在探索水牛生發(fā)泡(GV)期卵母細(xì)胞程序化冷凍保存的條件,希望能提高其保護(hù)效果,為水牛的IVM、IVF、核移植等生物技術(shù)提供實(shí)驗(yàn)材料.該實(shí)驗(yàn)采用程序化冷凍方法,對(duì)不同植冰溫度(-5.5℃、-6℃、-6.5℃、-7℃

2、)下幾種冷凍液[PBSm(PBS+FBS)、PEGF(PBSm+EG+GL)、PEF(PBSm+EG)、PGF(PBSm+GL)]的結(jié)晶變化進(jìn)行了探討,進(jìn)而探討了不同植冰溫度(-6℃、-6.5℃、-7℃)、不同冷凍保護(hù)液[PBSm(對(duì)照)、PEGF、PEF、PGF]對(duì)水牛GV期卵母細(xì)胞的冷凍保護(hù)效果.1.實(shí)驗(yàn)過程中我們將水牛卵巢采卵情況與一同采回的黃牛卵巢采卵情況作了比較:從單個(gè)水牛卵巢回收的卵母細(xì)胞數(shù)平均為4.85個(gè),從單個(gè)黃牛卵巢回

3、收的卵母細(xì)胞數(shù)平均為13.4個(gè),平均每個(gè)卵巢回收卵母細(xì)胞數(shù)水牛明顯低于黃牛,外觀形態(tài)正常、可用的卵母細(xì)胞比率也極顯著低于黃牛(水牛66.3％,黃牛87.9％,P<0.01).2.在-5.5℃、-6℃、-6.5℃、-7℃四種溫度下植冰,以植冰后平衡10min結(jié)晶為適宜的保護(hù)指標(biāo),用PBSm作對(duì)照,觀察PEGF、PEF、PGF在植冰后不同時(shí)間(2,5,8,10,15min)的結(jié)晶情況.3.-6℃、-6.5℃、-7℃三種植冰溫度下植冰,程序化

4、冷凍解凍水牛GV期卵母細(xì)胞的形態(tài)正常率.4.-6℃、-6.5℃、-7℃植冰,程序化冷凍解凍后水牛GV期卵母細(xì)胞成活率(0.8％臺(tái)盼蘭染色判斷)為:PEGF(76.9％、87.5％、83.3％)>PEF(64.0％、70.8％、66.7％)>PGF(47.4％、55.0％、55.6％)>PBSm(16.7％、37.5％、35.3％).5.-6℃、-6.5℃、-7℃三種植冰溫度植冰,程序化冷凍解凍后水牛GV期卵母細(xì)胞成熟率.6.通過將冷凍處