登革Ⅱ型病毒EDⅢ與登革病毒受體蛋白的鑒定及功能評價.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2011級博士學(xué)位論文登革II型病毒EDIII與登革病毒受體蛋白的鑒定及功能評價IdentificationandevaluationofDENV2一EDIIIandpotentialreceptormoleculesOIant卜dengUeVlrUSl1●●J■1●課題來源：國家自然基金項目(NO：30872l98；30972566)學(xué)位申請人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院楊永紅鄭學(xué)禮病原生物學(xué)科研型博士研究生公

2、共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)院答辯委員會主席余新炳教授答辯委員會委員余新炳教授朱家勇教授吳忠道教授閆桂云教授倫照榮教授黃曦教授2014年6月8日廣州摘要進(jìn)行深入研究，并從中發(fā)掘有效的靶分子是媒介傳播病毒學(xué)研究的當(dāng)務(wù)之急。病毒通過與易感的宿主細(xì)胞表面受體分子結(jié)合后經(jīng)介導(dǎo)的內(nèi)吞作用侵染細(xì)胞，在胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)完成一系列的復(fù)制、翻譯、組裝、增殖及釋放的過程。而病毒與宿主細(xì)胞表面受體分子的結(jié)合是發(fā)生病毒侵染細(xì)胞的先行條件，病毒在受體的介導(dǎo)下最終進(jìn)入宿主細(xì)胞，從

3、而出現(xiàn)一系列反應(yīng)。鑒于此，我們的研究方向從病原學(xué)方面，以及易感宿主細(xì)胞膜受體來探索潛在的靶分子。對登革病毒結(jié)構(gòu)的認(rèn)識，目前認(rèn)為DENV是單股正鏈RNA病毒，基因組RNA約含有l(wèi)lkb核苷酸?；蚪M存在一個開放讀碼框，其5’端編碼三種結(jié)構(gòu)蛋白(C、M／prM和E)，3’端編碼七個非結(jié)構(gòu)蛋白(NSl、NS2A、NS2BNS3、NS4A、NS4B、NS5)。E蛋白是結(jié)構(gòu)蛋白中主要的包膜糖蛋白，是由兩個單聚體組成的分子量約5560kDa的同源二

4、聚體，這種表面結(jié)構(gòu)蛋白是登革病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞的一個重要靶點。結(jié)晶學(xué)對登革病毒的深入研究結(jié)果進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，登革病毒包膜糖蛋白E有3個結(jié)構(gòu)域(IIII)：第一結(jié)構(gòu)域位于中心的13桶狀結(jié)構(gòu)、第二結(jié)構(gòu)域則包含內(nèi)融合肽，決定二聚體的形成。第三結(jié)構(gòu)域折疊為免疫球蛋白樣，是結(jié)構(gòu)相對獨立的受體結(jié)合區(qū)，垂直伸出病毒表面形成突起，包含能誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性中和抗體的型和亞型抗原表位，是病毒與受體結(jié)合的主要部位。因此對第三結(jié)構(gòu)域的研究成為登革病毒疫苗、病毒與宿主細(xì)胞

5、受體相互作用的重要靶點。通過對登革II型病毒E蛋白第三結(jié)構(gòu)域的生物信息學(xué)分析顯示，其相對分子量為107905，屬于穩(wěn)定蛋白。從登革病毒的RNA病毒全長，到主要表面結(jié)構(gòu)蛋白E蛋白，再到E蛋白的第三結(jié)構(gòu)域，一是使得我們的研究范圍能不斷聚焦至目標(biāo)靶分子，二是利用截短的病毒受體功能區(qū)有助于提高病毒受體篩選的成功率和準(zhǔn)確性。對于登革病毒受體的研究一直廣受重視。這種典型的蚊媒病毒能夠感染，不同組織來源的多種細(xì)胞。由于病毒與受體結(jié)合步驟多且過程復(fù)雜，