登革2型病毒的分離純化及其核衣殼蛋白的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文登革2型病毒的分離純化及其核衣殼蛋白的表達姓名：戴偉君申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物物理指導(dǎo)教師：張景強20040521———墨!墨二——量蘭!型墮童箜坌童絲些墨苧墮壅塞蘭旦箜室竺!生苧蘭堡主芏堡壘查PurificationandidentificationofDen2virusandexpressionofitscapsidgeneDaiWeijunAbstractThefirststepofcro—EMrecons

2、tructionistoobtainlargenumbersofvirionswhicharepureandretainedpreviousbiologicstructureinsamplesC6／36AedesalbopictuswereselectedtopropagateDen2virusCellswereinfectedwithDen一2virusandculturedat36℃withthepHoftheMEMat613～68

3、WhencellswereinCPEstage～theviroswerepurifiedfromcellculturebydifferentcentrifugatinnsplussugardensitygradientcentrifugationsThevirionspurifiedaccordwiththerequestofClOEMreconstructionThevironswereconfirmedfirstbyIFASecon

4、dlythevironswereidentifiedbyPCRtechniquewithserogroup—primersorrandomprimersTheamplifiedfragmentsweresequencedanditwascomparedwithDen一2virusNewGuinesCstrainknownfromGenBankTheresultshowedthattheirhomologywas99％，suggestin

5、gthattheparticlepurifiedwasexactDen一2virusNewGuinesCstrainThevironscanbeusedinfurtherstudyforthehighresolutioncro—EMreconstructionandthestudyoftheinteractionbetweenDen2virusanditsantibodiesOntheotherhand，theCgenefromDen2

6、virushadbeenclonedintotheEcoliexpressionvectorpET28b()，creatingtherecombinantplasmidPETDen一2一C，whichwasthentransformedintoDE3SDSPAGEandwestern—blotanalysisshowedthattheCgenewasexpressedinthestrainDE3(PETDen2C)withthemole

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