家蠶儲(chǔ)存蛋白Storage protein(SP3)基因克隆及調(diào)節(jié)黑化作用的研究.pdf

1、Storage protein(SP),是家蠶的儲(chǔ)存蛋白,由幼蟲(chóng)的脂肪體合成,然后釋放到血淋巴中并積累。本文以家蠶為材料,克隆了家蠶的儲(chǔ)存蛋白(Bmsp3)基因序列,根據(jù)基因序列推測(cè)了其氨基酸序列,并與昆蟲(chóng)其他儲(chǔ)存蛋白的氨基酸序列進(jìn)行了比對(duì)分析,檢測(cè)了sp3在家蠶幼蟲(chóng)4齡及5齡3天時(shí)精巢、卵巢、表皮、脂肪體、血液、中腸、絲腺、馬氏管的表達(dá),研究還發(fā)現(xiàn),sp3參與外源siRNA誘導(dǎo)的黑化作用。本研究主要內(nèi)容包括：
　?、偶倚Q儲(chǔ)存蛋白

2、基因sp3的克隆和序列分析。以家蠶脂肪體 cDNA為模板,擴(kuò)增并克隆了家蠶儲(chǔ)存蛋白 sp3基因。家蠶sp3基因開(kāi)放閱讀框2091bp,編碼696個(gè)氨基酸。預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)分子量約為82.10 kDa,等電點(diǎn)約5.90,信號(hào)肽是前27-74位。家蠶sp3與煙草天蛾β-芳基儲(chǔ)存蛋白亞基,蘇托斯鳳蝶芳基儲(chǔ)存蛋白,鈴夜蛾幼蟲(chóng)血清蛋白1的核酸序列及氨基酸進(jìn)行序列比對(duì),核酸序列比對(duì)同源性達(dá)75％以上,氨基酸序列同源性也很高,如與β-芳基儲(chǔ)存蛋白亞基同源性

3、為62.5％,芳基儲(chǔ)存蛋白同源性53.4％,幼蟲(chóng)血清蛋白1同源性達(dá)60.6％。
　?、艬msp3組織特異性表達(dá)。家蠶4齡及5齡幼蟲(chóng)3天時(shí)精巢、卵巢、表皮、脂肪體、血液、中腸、絲腺、馬氏管中Bmsp3的轉(zhuǎn)錄水平,結(jié)果顯示sp3在上述組織均有表達(dá),其中在血液與脂肪體中含量最多,且5齡高于4齡。
　?、莝p3參與外源siRNA誘導(dǎo)的家蠶黑化作用。siRNA片段轉(zhuǎn)染家蠶,處理后0 h,12 h,24 h,48 h檢測(cè)家蠶幼蟲(chóng)血淋巴的