家蠶Bm-lethal基因的克隆、表達(dá)及功能研究.pdf

1、蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文家蠶Bmlethal基因的克隆、表達(dá)及功能研究姓名：魯延軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物飼養(yǎng)指導(dǎo)教師：徐世清司馬楊虎20080501家蠶Bm如f_lz口，基因的克隆、表達(dá)及功能研究摘要(nucIeoIarprotein14)蛋白質(zhì)家族功能域，與人、鼠等物種的Nopl4具有40％50％的同源性，推測(cè)其為N0p】4蛋白基因。Bm彪歷口故3)02640的氨基酸包含一個(gè)膽色素原脫氨酶的保守區(qū)，又是dipyrometha

2、ne輔助因子的綁定區(qū)域，與其它物種的膽色素原脫氨酶的蛋白質(zhì)N端部分有60％70％的同源性，推測(cè)其為膽色素原脫氨酶基因。Bmfef2的蛋白質(zhì)與按蚊、蜜蜂、人等物種的b，peIVcollagen僅1(IV)鏈有較高的同源性，其C端包含2個(gè)重疊的typeIVconagen保守區(qū)和9個(gè)collagen蛋自家族功能域，說明其為typeⅣcollagen蛋白質(zhì)基因。利用家蠶dbWGS，結(jié)合RTPCR等生物實(shí)驗(yàn)，拼接完成了Bm一彪歷口Z(2)和Bm昆

3、卜2的全基因序列。并利用MAGE3分別對(duì)其進(jìn)行同源進(jìn)化樹分析，顯示其均與蜜蜂、果蠅等昆蟲的進(jìn)化距離較近，而與人、牛等哺乳動(dòng)物的進(jìn)化距離較遠(yuǎn)，與傳統(tǒng)理論的進(jìn)化關(guān)系相一致。3Bm跆砌口拗基因的原核表達(dá)、時(shí)空表達(dá)分析及RNAi研究原核表達(dá)實(shí)驗(yàn)，證明Bm紀(jì)砌口，(2)能夠在原核細(xì)胞中大量誘導(dǎo)表達(dá)。時(shí)空表達(dá)研究證明，Bm拓歷口改2)基因在血液中的表達(dá)量較少，而在生殖腺、脂肪體、絲腺和中腸中沒有發(fā)現(xiàn)明顯的組織表達(dá)特異性；Bm絕砌日f(2)基因在5齡

4、幼蟲階段的表達(dá)量逐漸上升，在蛹期顯著下降，而在處女蛾卵期的表達(dá)量卻最高，之后下降。在產(chǎn)卵后72h、及鹽酸活化處理1h時(shí)幾乎沒有表達(dá)。IuNAi研究顯示，注射Bmfef加f(2)dsRNA后，Bm比歷口f(2)的表達(dá)量明顯下降，但家蠶的生命力沒有發(fā)生明顯變化，在注射后9d，Bm彪疏2必2)RNAi組家蠶的體重明顯高于陰性和陽性對(duì)照組。Bm尾歷口，(2)基因被抑制后，可能有其它基因代替執(zhí)行其相應(yīng)的功能。關(guān)鍵詞：家蠶彪砌口J『電子克隆原核表達(dá)