不同日齡仔豬胃腸道Obestatin蛋白含量及GHRL基因轉(zhuǎn)錄水平測定.pdf

1、Obestatin是一種Ghrelin相關(guān)肽，來源于胃生長素前體肽(GHRL)基因。Obestatin的分子量為2516.3Da，有23個氨基酸殘基，位于GHRL的76-98多肽片段。Obestatin的氨基酸區(qū)域具有高度保守性，其生物活性依賴于C端的酞胺化修飾。Obestatin在鼠胃腸道、胰腺、睪丸間質(zhì)細(xì)胞、下丘腦、腦垂體等部位均有表達(dá)，可以和（G-蛋白偶聯(lián)受體39）GPR39結(jié)合，能夠抑制動物饑餓感、食物攝取、胃排空、空腸的蠕動及

2、體重的增加。此外，Obestatin還能夠抑制飲水、保護(hù)心肌細(xì)胞、調(diào)節(jié)胰島素抵抗、緩解焦慮、促進(jìn)睡眠、提高學(xué)習(xí)及空間記憶能力等。Obestatin與Ghrelin是由相同的基因、mRNA和相同的前體多肽衍生的，但兩者的生物學(xué)效應(yīng)表現(xiàn)出相互拮抗的作用，因此Obestatin稱認(rèn)為是Ghrelin的陰陽活性多肽或生物學(xué)拮抗劑。Obestatin的發(fā)現(xiàn)豐富了翻譯后修飾在基因表達(dá)調(diào)控過程中的作用，具有很重要的研究意義。
　　Obestat

3、in已經(jīng)被證明在能量穩(wěn)態(tài)和體質(zhì)量控制的復(fù)雜機(jī)制中起著很重要的生物學(xué)效應(yīng)，而Obestatin在豬消化系統(tǒng)中的作用研究以及表達(dá)差異還很少;而仔豬階段是肉豬生產(chǎn)育肥過程中的關(guān)鍵時期。因此我們檢測了不同生長階段仔豬胃腸道Obestatin的蛋白濃度及GHRL基因的表達(dá)水平，以探討其表達(dá)規(guī)律。我們的工作為仔豬胃腸道發(fā)展以及能量代謝過程中Obestatin所發(fā)揮的生物學(xué)作用的深入研究提供了實驗依據(jù)和參考價值。
　　本實驗選用初生仔豬(1d)

4、、哺乳仔豬(15d)、斷奶仔豬(30d)和保育仔豬(45d)，并采取胃賁門、胃竇部、十二指腸、空腸和結(jié)腸組織。所取組織一部分用于總蛋白的提取，檢測各組織總蛋白濃度并用磷酸鹽緩沖液稀釋至2.000mg/mL，最后用ELISA試劑盒檢測不同日齡仔豬胃腸道組織Obestatin的蛋白濃度。另一部分組織用于提取總RNA，并在反轉(zhuǎn)錄之后采用實時熒光定量PCR法對不同日齡仔豬胃腸道組織GHRLmRNA的表達(dá)水平進(jìn)行測定。運(yùn)用SPSS Statist

5、ics 17.0分析實驗結(jié)果。
　　結(jié)果顯示:
　　1.Obestatin蛋白在仔豬胃腸道變化趨勢相同:即在15d其濃度顯著低于1d(p＜0.05)，隨后從第30d至45d呈漸進(jìn)地增加。
　　2.不同生長階段仔豬的不同胃腸道組織間Obestatin的濃度差異不顯著。
　　3.GHRLmRNA在仔豬胃賁門第1d表達(dá)量最高，15d顯著下降(p＜0.05)，隨后在30d和45d呈漸進(jìn)性增多的趨勢，而在胃竇則表現(xiàn)為漸進(jìn)增