綿羊多核絨毛膜滋養(yǎng)層細胞的培養(yǎng)純化及生長的研究.pdf

1、綿羊多核絨毛膜滋養(yǎng)層細胞來源于胎盤合體滋養(yǎng)層，位于母胎界面，大部分位于胎盤子葉中，其功能主要是轉(zhuǎn)移和運輸胎兒所需的營養(yǎng)物質(zhì)、進行氣體交換、分泌多種激素，并保護胎兒免受母體免疫系統(tǒng)的損傷。體外培養(yǎng)得到較高純度的綿羊多核絨毛膜滋養(yǎng)層細胞可以為后續(xù)細胞轉(zhuǎn)染、細胞生長研究和細胞生物學特性測定等試驗提供細胞學基礎(chǔ)，可為研究病毒與宿主的互作提供細胞學基礎(chǔ)。
　　本試驗選取妊娠中期的綿羊胎盤子葉作為取樣部位，采用胰蛋白酶和膠原酶兩步消化法分離培

2、養(yǎng)細胞，通過倒置相差顯微鏡觀察滋養(yǎng)層細胞的形態(tài)學特點，應用常規(guī)HE染色和免疫組織化學染色法，透射電子顯微鏡技術(shù)對綿羊多核絨毛膜滋養(yǎng)層細胞進行鑒定。倒置相差顯微鏡下，滋養(yǎng)層細胞為雙核及多核細胞，細胞形態(tài)為上皮樣細胞，呈片狀鋪展生長。常規(guī)HE染色結(jié)果表明胎盤子葉部位存在大量多核滋養(yǎng)層細胞，培養(yǎng)的滋養(yǎng)層細胞出現(xiàn)雙核及多核現(xiàn)象;對胎盤子葉與培養(yǎng)的滋養(yǎng)層細胞用細胞角蛋白7(CK7)進行免疫組織化學染色，胎盤子葉多核滋養(yǎng)層細胞與培養(yǎng)的滋養(yǎng)層細胞胞質(zhì)

3、區(qū)域結(jié)果均為棕色陽性信號;利用透射電鏡技術(shù)，在電鏡下可見滋養(yǎng)層細胞表面微絨毛發(fā)達，胞質(zhì)內(nèi)有較多膜包小泡及豐富的微絲和脂滴。
　　本試驗應用Percoll通過密度梯度離心法對培養(yǎng)的原代細胞進行純化，重復試驗，得出選用40％和60％兩個梯度純化滋養(yǎng)層細胞，純化后雙核及多核滋養(yǎng)層細胞比例高，純化率達80％以上。在此基礎(chǔ)上，從細胞的穩(wěn)定性和適應性方面進行了滋養(yǎng)層細胞的生長研究，根據(jù)連續(xù)7天的觀察和CCK-8跟蹤標記的數(shù)據(jù)作出對應的生長曲線