LPS抑制小鼠和肉雞食欲的機制研究.pdf

1、本試驗以LPS誘導的厭食肉雞為模型，分別對其多條作用通路進行探索試圖尋找出一個可以干擾由炎癥反應引發(fā)的食欲下降的關鍵因子。下丘腦作為采食調控的關鍵位置，存在大量的食欲基因和蛋白，試驗采用腦室注射的方法，阻斷其中一條通路，檢測其厭食效果及炎癥反應是否被削弱，從而為改善動物采食情況提供理論依據(jù)。
　　試驗一:選取體重相近的10日齡AA肉雞32只隨機分為4組，按照肉雞飼養(yǎng)手冊控制濕度和溫度，肉雞可進行自由飲水和采食，單籠單飼。試驗前，所

2、有組禁食24h后，分別按照濃度梯度0，0.5，1，2mg/kg體重的劑量腹腔注射LPS。記錄24h的采食量及96h的體重變化。結果發(fā)現(xiàn):LPS處理的濃度在0.5mg/kg的時候就足以引起動物采食下降，且采食量在4小時開始與對照組差異顯著，隨著LPS濃度的增加并未發(fā)現(xiàn)存在劑量依賴性。為之后試驗的處理劑量和采樣時間提供參考。
　　試驗二:選取體重相近的10日齡的AA肉雞24只，隨機分為2組，按照肉雞飼養(yǎng)手冊控制濕度和溫度，肉雞可進行自

3、由飲水和采食，單籠單飼。試驗前，所有組禁食24h后，分別按照0，0.5mg/kg體重的劑量腹腔注射LPS。注射LPS4h后，將肉雞斷頭，迅速剝離下丘腦，測定下丘腦內(nèi)的食欲基因，炎癥因子的mRNA水平以及食欲相關蛋白的表達。結果發(fā)現(xiàn):LPS處理顯著促進了炎癥因子IL-1β的釋放，且顯著抑制了誘食基因AgRP的表達;利用Western Blotting技術檢測NF-κB、AMPK、mTOR、FoxO1信號通路的磷酸化水平，LPS處理激活了炎

4、癥因子作用靶點NF-κB和mTOR通路，顯著升高了FoxO1的磷酸化水平，抑制了FoxO1的活性，而LPS處理未對AMPK產(chǎn)生影響。結果可以看出，LPS處理促進炎癥因子的釋放作用于NF-κB，從而引起采食量的變化，mTOR通路可能參與LPS誘導的動物厭食行為。
　　試驗三:選取體重相近的10日齡的AA肉雞64只，隨機分為A、B、C、D共4個組，按照肉雞飼養(yǎng)手冊控制濕度和溫度，肉雞可進行自由飲水和采食，單籠單飼。試驗前，所有組禁食2

5、4h后，A組和C組腦室注射濃度為25mg/ml的mTOR阻斷劑Rapamycin2μl;B組和D組注射溶劑2μl DMSO。腦室注射1小時后，按照0.5mg/kg體重的劑量腹腔注射LPS，每組8只用作記錄24h的采食量。另8只在注射LPS4h后，將其斷頭，迅速剝離下丘腦，用于樣品的分析。測定下丘腦內(nèi)的食欲基因，炎癥因子的mRNA水平以及食欲相關蛋白的表達。結果發(fā)現(xiàn):腦室注射Rapamycin后再進行LPS的腹腔注射，可以緩解動物的采食量