生長素在應(yīng)激肉雞食欲調(diào)控中的作用研究.pdf

1、為探討ghrelin在應(yīng)激肉雞食欲調(diào)控中的作用，本研究以活體入手，外周以腹腔或靜脈注射方式、中樞以腦室注射方式，研究外源導(dǎo)入ghrelin或CRF對肉仔雞采食量的影響，同時分析下丘腦、腸道內(nèi)相關(guān)基因表達情況，為分析ghrelin、CRF對肉仔雞作用提供一定的理論依據(jù)。
　　首先，本研究通過外援導(dǎo)入ghrelin的方法，觀察ghrelin對肉仔雞食欲、CRF系統(tǒng)的影響，分四個實驗。試驗一，腹腔注射ghrelin對肉仔雞采食量的影響。

2、選取體重相近的雄性AA肉仔雞40只，7日齡時隨機分為4個組，單籠單飼，10日齡早八點腹腔注射ghrelin或者生理鹽水，按照ghrelin注射劑量分為0.8nmol組(0.8nmol/100g BW)、1.0nmol組(1.0nmol/100g BW)、1.2nmol組(1.2nmol/100g BW)、Control組（生理鹽水）。注射后在第30、60、90、120分鐘，統(tǒng)計采食量。試驗結(jié)果顯示，腹腔注射ghrelin呈劑量依賴性關(guān)系

3、降低雛雞采食量;腹腔注射ghrelin1.2nmol/100g BW90min內(nèi)顯著降低了雛雞采食量;在現(xiàn)有注射劑量下，ghrelin誘導(dǎo)的雛雞采食量下降在120min內(nèi)恢復(fù)。試驗二，腹腔注射ghrelin對肉仔雞下丘腦、腸道相關(guān)基因表達的影響。選取試驗一中對采食量抑制效果最明顯的劑量(1.2nmol/100g)、時間(60min)，分1.2nmol組(1.2nmol/100g BW)、Control組（生理鹽水）兩組重復(fù)試驗一，并測定

4、下丘腦、腸道中相關(guān)mRNA的表達量。試驗主要結(jié)果顯示，下丘腦中食欲相關(guān)基因(NPY/AgRP/POMC)無顯著變化，說明ghrelin誘導(dǎo)的肉仔雞采食量降低，可能不是通過NPY/AgRP信號系統(tǒng)進行調(diào)控的;空腸CRF、CRFR1基因表達顯著降低，說明ghrelin誘導(dǎo)的肉仔雞采食量降低，可能與腸道CRF信號系統(tǒng)的響應(yīng)有關(guān)。試驗三，腦室注射ghrelin對肉仔雞采食量的影響。試驗采用雄性AA肉仔雞，正常飼喂，7日齡時挑選體重相近(150±

5、5g)個體30只，根據(jù)Davis et al.(1979)和Furuse et al.(1999)的方法進行腦室埋管，隨機分為3個組，單籠單飼，恢復(fù)三天。10日齡早八點腦室注射ghrelin或者生理鹽水，按照ghrelin注射劑量分為5ug組(5ug)、7.5ug組(7.5ug)、Control組（生理鹽水）。注射后在第30、60、90、120分鐘，統(tǒng)計采食量。試驗結(jié)果顯示，腦室注射ghrelin降低了雛雞采食量，且呈劑量依賴性關(guān)系，在

6、現(xiàn)有劑量下7.5ug作用效果最明顯。試驗四，腦室注射ghrelin對肉仔雞下丘腦、腸道相關(guān)基因表達的影響。選取試驗三中對采食量抑制效果最明顯的劑量(7.5ug)、時間(120min)，分7.5ug組(7.5ug)、Control組（生理鹽水）兩組重復(fù)試驗三，并測定下丘腦、腸道中相關(guān)mRNA的表達量。試驗主要結(jié)果顯示，下丘腦中食欲相關(guān)基因(NPY/AgRP/POMC)無顯著變化;顯著降低了十二指腸中CRF及其受體，回腸中CRF受體的基因表

7、達說明進一步驗證了試驗二的結(jié)果;腦室注射ghrelin顯著升高了下丘腦、十二指腸、回腸中g(shù)hrelin基因表達豐度(P＜0.05)，可能是由于外源性ghrelin降低了雛雞采食，產(chǎn)生饑餓信號，進而導(dǎo)致內(nèi)源性ghrelin響應(yīng)。
　　其次，通過外援導(dǎo)入CRF的方法，觀察CRF對肉仔雞采食量及ghrelin信號系統(tǒng)的影響，分四個實驗。試驗一，靜脈注射CRF對肉仔雞采食量的影響。選取體重相近的雄性AA肉仔雞40只，7日齡時隨機分為4個組

8、，單籠單飼，10日齡早八點翅靜脈注射CRF或者生理鹽水，按照CRF注射劑量分為1.0ug/100g BW組、2.0ug/100g BW組、100.0ug/100g BW組、Control組（生理鹽水）。注射后在第30、60、90、120分鐘，統(tǒng)計采食量。試驗結(jié)果顯示，外周靜脈注射高劑量CRF(100.0ug/100g BW)能誘導(dǎo)雛雞采食量降低。試驗二，靜脈注射CRF對肉仔雞下丘腦、腸道相關(guān)基因表達的影響。選取試驗一中對采食量抑制效果最

9、明顯的計量(100.0ug/100g BW)、時間(120min)，分100.0ug/100g BW組、Control組（生理鹽水）兩組重復(fù)試驗一，并測定下丘腦、腸道中相關(guān)mRNA的表達量。試驗結(jié)果顯示，靜脈注射CRF(100ug/100g BW)對顯著升高了雛雞下丘腦ghrelin表達豐度，這可能是CRF誘導(dǎo)肉仔雞采食量降低的原因;靜脈注射CRF對雛雞下丘腦、腸道ghrelin影響存在差異，且腸道各段響應(yīng)CRF的閾值不同，十二指腸響應(yīng)

10、閾值較低;外源性CRF能引起機體CRFR1、CRFR2基因表達的升高;靜脈注射CRF(100ug/100g BW)顯著升高了腸道各段GHSR-1a的基因表達豐度，這可能是由于CRF激活HPA軸，誘導(dǎo)糖皮質(zhì)激素合成與釋放，外周糖皮質(zhì)激素含量升高引起GHSR-1a mRNA表達升高。試驗三，腦室注射CRF對肉仔雞采食量的影響。采用雄性AA肉雞，正常飼喂，7日齡時挑選體重相近(150±5g)個體40只，根據(jù)Davis et al.(1979)

11、和Furuse et al.(1999)的方法進行腦室埋管，隨機分為4個組，單籠單飼，恢復(fù)三天。10日齡早八點腦室注射CRF或者生理鹽水，按照CRF注射劑量分為5ug組、10ug組、20ug組、Control組（生理鹽水）。注射后在第30、60、90、120分鐘，統(tǒng)計采食量。試驗結(jié)果顯示，中樞注射CRF在一定范圍內(nèi)能呈劑量依賴性的降低雛雞采食量，且是一個典型的二次神經(jīng)元反應(yīng);在現(xiàn)有劑量下10ug作用效果最明顯。試驗四，腦室注射CRF對肉

12、仔雞下丘腦、腸道相關(guān)基因表達的影響。選取試驗三中對采食量抑制效果最明顯的計量(10ug)、時間(120min)，分10ug組、Control組（生理鹽水）兩組重復(fù)試驗三，并測定下丘腦、腸道中相關(guān)mRNA的表達量。試驗結(jié)果顯示，腦室注射CRF(10ug)顯著升高了雛雞下丘腦中g(shù)hrelin基因表達豐度，進一步驗證了試驗二，且哺乳動物中觀察到的結(jié)果相似;然而腦室注射CRF(10ug)顯著降低了雛雞腸道（十二指腸、空腸、回腸）中g(shù)hrelin