豬3種繁殖障礙性病毒多重PCR監(jiān)測方法的建立.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)和豬偽狂犬病(PR)是影響?zhàn)B豬業(yè)發(fā)展的兩種重要的傳染病,而引起這兩種疾病的病原就是豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(HP-PRRSV)及豬偽狂犬病病毒(PRV)。這三種病毒均是引起豬繁殖障礙性疾病的重要病原體,且在臨床上多發(fā)生混合感染,雖然運(yùn)用常規(guī)的病原學(xué)和血清學(xué)診斷方法也可區(qū)分此類癥狀相似的疾病,但這些常規(guī)方法卻存在操作繁雜,耗時(shí)長,敏感性低等不足,難以用于混合感染時(shí)兩

2、種疫病的早期快速診斷。許多學(xué)者相繼建立了檢測PRRSV、HP-PRRSV和PRV的PCR技術(shù),但同時(shí)鑒別檢測這3種病毒的多重PCR方法還未見報(bào)道。因而,本試驗(yàn)建立了一種能夠快速、準(zhǔn)確、有效的檢測PRRSV、HP-PRRSV和PRV的多重PCR方法,并應(yīng)用該方法對送檢的120份臨床病料進(jìn)行了檢測。
　　1、PRRSV、HP-PRRSV和PRV多重PCR方法的建立
　　根據(jù)GenBank中登錄的PRRSV、HP-PRRSV的Ns

3、p2基因缺失區(qū)序列信息及PRV的gB基因保守區(qū)序列,利用Primer Premier 5.0和DNAStar軟件分別設(shè)計(jì)并合成了2對特異性擴(kuò)增引物,擴(kuò)增目的片段長度分別為319bp、232bp、383bp。在成功建立單項(xiàng)PCR的基礎(chǔ)上,通過對模板濃度、酶濃度及引物混合液濃度等條件的優(yōu)化,先進(jìn)行了HP-PRRSV和PRV雙重PCR的建立;而后在雙重PCR的基礎(chǔ)上,通過調(diào)整PRRSV模板的添加量和同時(shí)擴(kuò)增PRRSV、HP-PRRSV的引物混

4、合液用量,最終建立起能夠同時(shí)鑒別檢測PRRSV、HP-PRRSV和PRV的多重PCR診斷方法。該方法具有良好的特異性,敏感性試驗(yàn)表明,該方法能檢測出3種病毒的最低模板量分別約為2.48ng、2.22ng和0.44ng。
　　2、PRRSV、HP-PRRSV和PRV多重PCR方法的初步應(yīng)用
　　利用已建立的PRRSV、HP-PRRSV和PRV多重PCR方法對安徽省部分地區(qū)送檢的120份臨床病料進(jìn)行了檢測,結(jié)果顯示,檢出PRRS

5、V陽性樣品23份,HP-PRRSV陽性樣品71份,PRV陽性樣品40份,總陽性檢出率分別為19.2％、59.2%、33.3%。其中,混合感染PRRSV和HP-PRRSV的樣品有8份,占總數(shù)的6.7%;混合感染
　　HP-PRRSV和PRV的樣品22份,占總數(shù)的18.3%;混合感染PRRSV、HP-PRRSV和PRV的樣品15份,占總數(shù)的12.5%。由此說明,送檢病料中以HP-PRRSV感染為主,且發(fā)生混合感染。
　　以上研究