PRRS、PCVD and CSF病毒多重PCR方法的建立及其應(yīng)用研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)、豬圓環(huán)病毒病(PCVD)和豬瘟(CSF)是危害養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的一類重要的傳染病,這三種疾病每年均給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。這三種病均能引起豬繁殖障礙和呼吸系統(tǒng)疾病,由于這三種疾病的臨床表現(xiàn)非常相似,臨床診斷容易引起混淆,因此早期的鑒別診斷對(duì)控制這三種疾病的流行顯得尤其重要。目前針對(duì)這三種病的病原體的常規(guī)診斷方法有病原分離鑒定和血清學(xué)等方法。病原分離鑒定繁瑣、耗時(shí)、檢出率低；血清學(xué)方法雖然簡(jiǎn)便快速,但存在非特

2、異性反應(yīng),并且不能完全區(qū)別免疫接種與自然感染陽(yáng)性等缺點(diǎn)。有學(xué)者建立了檢測(cè)PRRSV、PCV2和CSFV的PCR技術(shù),但同時(shí)檢測(cè)這三種病毒的多重PCR方法還未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)建立了一種快速、敏感、特異的檢測(cè)PRRSV、PCV2和CSFV多重PCR方法,并使用該方法對(duì)臨床病料進(jìn)行了檢測(cè)。 1檢測(cè)PRRSV、PCV2和CSFV多重PCR的建立參照GeneBank收錄的豬繁殖與呼吸綜合征病毒美洲型標(biāo)準(zhǔn)株(ATCCVR-2332)的ORF7

3、保守序列、豬圓環(huán)病毒2型(AF381175)的ORF2基因保守序列和豬瘟病毒的E2基因保守序列,設(shè)計(jì)合成了三對(duì)特異性引物。通過(guò)優(yōu)化鎂離子濃度、引物濃度和退火溫度等條件,建立了檢測(cè)PRRSV、PCV2和CSFV的多重PCR方法。該方法特異性強(qiáng),靈敏度高,能檢出三種病毒的最低含量分別為4.8 pg、5.0 pg和14.5 pg。 2 PRRSV、PCV2和CSFV多重PCR方法的臨床應(yīng)用利用建立的PRRSV、PCV2和CSFV多重P

4、CR方法對(duì)安徽省合肥、安慶、六安、蚌埠、滁州、巢湖、淮北、宿州、阜陽(yáng)和池州10個(gè)地區(qū)的120份臨床疑似病料進(jìn)行檢測(cè),除阜陽(yáng)地區(qū)未分離到PRRSVV和CSFV外,PRRSV、PCV2和CSFV總陽(yáng)性檢出率分別為58.33％、49.17％和23.33％。經(jīng)生物統(tǒng)計(jì)分析,PRRSV和PCV2的感染在安徽省豬群中最為嚴(yán)重,且有上升的趨勢(shì)。此外,PRRSV的感染還存在明顯的地區(qū)差異,其中安慶、六安和滁州地區(qū)感染嚴(yán)重。 對(duì)病料進(jìn)行PRRSV

5、、PCV2和CSFV混合感染的檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果是PRRSV與PCV2、PRRSV與CSFV、PCV2與CSFV以及PRRSV、PCV2、CSFV三者混合感染的陽(yáng)性檢出率分別為32.50％、17.50％、9.17％、6.67％。經(jīng)生物統(tǒng)計(jì)分析,在安徽省發(fā)病豬群中存在著PRRSV、PCV2和CSFV的混合感染,其中以PRRSV與PCV2的混合感染率最高。 3高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Nsp2 1594～1680)RT-PCR檢測(cè)

6、試劑盒和PRRSV美洲型標(biāo)準(zhǔn)株(ATCCVR-2332)PCR方法的比較應(yīng)用高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒((Nsp2 1594～1680)RT-PCR檢測(cè)試劑盒(方法1)和PRRSV美洲型標(biāo)準(zhǔn)株(ATCCVR-2332)PCR方法(方法2)對(duì)安徽省合肥、安慶、六安、滁州、巢湖、淮北、宿州和池州8個(gè)地區(qū)的65份病料進(jìn)行同步檢測(cè),方法1對(duì)病料的陽(yáng)性檢出率為73.84％,方法2對(duì)病料的陽(yáng)性檢出率為75.38％,兩種檢測(cè)方法的符合率達(dá)86.1