家蠶幼蟲中Hsp70家族的鑒定以及對非生物應(yīng)激的誘導(dǎo)表達模式.pdf

1、熱激蛋白Hsp70s（heat shock protein 70s）廣泛存在于生物體中，它在蛋白折疊以及阻止蛋白變性的過程中扮演重要角色。本研究中，我們對鱗翅目的家蠶（Bombyx mori）基因組中的熱激蛋白Hsp70s進行了同源比對檢索，共鑒定出11個Hsp70s成員。將家蠶11個Hsp70s氨基酸序列在黑腹果蠅﹑帝王蝶﹑意大利蜜蜂﹑岡比亞按蚊和赤擬谷盜五個物種預(yù)測的蛋白數(shù)據(jù)庫中進行本地Blastp比對，共鑒定出56個Hsp70s同

2、源性基因。其中黑腹果蠅熱激蛋白家族有13個Hsp70s基因，帝王蝶的有10個Hsp70s同源基因，岡比亞按蚊有9個Hsp70s同源基因，意大利蜜蜂有6個Hsp70s同源基因，而赤擬谷盜的同源Hsp70s基因最多（18個）。以家蠶和其他五種昆蟲的Hsp70s的蛋白序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹，結(jié)果表明Hsp70s在進化上可歸為兩簇，為別為HSP70（Heat shock induced proteins 70）和HSC70（Heat shock c

3、ognate proteins 70）。
　　根據(jù)果蠅的命名規(guī)則，我們將家蠶11個Hsp70s基因進行了命名，包括3個誘導(dǎo)型的熱激蛋白Hsp70s（Hsp68,Hsp70A和Hsp70B）以及8個組成型熱激蛋白（Hsc70-2,Hsc70-3,Hsc70-4,Hsc70-5,Hsc70-6,Hsc70-7,Hsc70-8和Hsc70-9）。通過與家蠶數(shù)據(jù)庫（SilkDB）blast比對，將家蠶的Hsp70s定位于對應(yīng)的染色體上，發(fā)

4、現(xiàn)家蠶Hsp70s共分布于8條染色體上。誘導(dǎo)型熱激蛋白Hsp70s的Hsp70A、Hsp68和Hsp70B基因串聯(lián)分布在第27條染色體上；組成型基因Hsc70-5和Hsc70-6均位于第15號染色體上并且也呈串聯(lián)分布；其余HSC70分別分布于不同的染色體上。
　　我們對Hsp70家族成員在家蠶五齡第三天幼蟲九個組織中的表達模式進行了分析，RT-PCR結(jié)果表明9個Hsp70s具有表達信號，其中3個誘導(dǎo)型的HSP70表現(xiàn)出組織特異性表

5、達模式，8個組成型熱激蛋白基因中只有3個（Hsc70-3,Hsc70-4和Hsc70-5）表現(xiàn)出在每個組織都表達的現(xiàn)象，即不是每個組成型HSC70基因都能在家蠶幼蟲所有組織中表達。經(jīng)過37oC和42oC的高溫刺激，我們對五齡第三天家蠶幼蟲的血液、中腸、脂肪體和絲腺中Hsp70s家族成員的誘導(dǎo)表達情況做了半定量PCR和熒光定量PCR分析，結(jié)果顯示Hsp70A,Hsp70B,Hsp68和Hsc70-4相對于對照組均被誘導(dǎo)表達，并且它們的最高

6、誘導(dǎo)上調(diào)表達量分別為607.1倍,1987.3倍,4147.3倍,以及7.5倍。而當家蠶幼蟲在2oC的低溫條件刺激時，Hsp70A,Hsp70B和Hsp68基因的表達量也在某些組織中被顯著誘導(dǎo)增加。此外，對家蠶幼蟲從五齡第三天開始分別喂食三種有機磷殺蟲劑不同劑量浸泡過的桑葉，并分析了中腸、脂肪體和絲腺中Hsp70s家族成員的誘導(dǎo)表達情況，半定量PCR結(jié)果顯示Hsp68基因能夠被低濃度以及高濃度的敵敵畏（40mg/L和80mg/L）和辛硫