ACTH和LPS對(duì)豬血液指標(biāo)及肝臟膽固醇代謝的影響.pdf

1、本試驗(yàn)旨在探索ACTH和LPS兩種不同的刺激狀態(tài)下豬血液及肝臟中的生理生化指標(biāo)變化，以期能綜合全面地評(píng)價(jià)動(dòng)物的應(yīng)激狀態(tài)，并發(fā)現(xiàn)能靈敏反映應(yīng)激狀況的標(biāo)記物，為動(dòng)物福利健康養(yǎng)殖奠定理論基礎(chǔ)。試驗(yàn)選取不同豬場(chǎng)不同品種的豬進(jìn)行血液生化指標(biāo)和血細(xì)胞常規(guī)數(shù)據(jù)的分析;研究肌肉注射ACTH對(duì)豬血液指標(biāo)瞬時(shí)和短期的影響;檢測(cè)LPS注射對(duì)豬血液指標(biāo)的影響并對(duì)其肝臟中的膽固醇代謝相關(guān)基因及蛋白進(jìn)行進(jìn)一步的研究。
　　1肌肉注射ACTH對(duì)豬血液指標(biāo)瞬時(shí)和

2、短期的影響
　　選擇15-20kg的杜洛克×長(zhǎng)白×大白去勢(shì)豬16頭，隨機(jī)分為2個(gè)處理組，ACTH組(ACTH)和對(duì)照組（Control）。每個(gè)處理設(shè)8個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭豬。全部單獨(dú)飼養(yǎng)。進(jìn)行頸靜脈瘺管手術(shù)，護(hù)理7天徹底恢復(fù)后，對(duì)豬進(jìn)行ACTH注射實(shí)驗(yàn)。正式試驗(yàn)開(kāi)始第一天，實(shí)驗(yàn)組每天9:00和16:00分兩次肌肉注射ACTH1IU/KGBW（事先溶解于生理鹽水中，使其終濃度為5IUACTH/ml），對(duì)照組注射等體積無(wú)菌生理鹽水。連

3、續(xù)注射7d。第5d注射后15，30，45，60，90，120min，由血管瘺管進(jìn)行采血5ml，EDTA抗凝制血漿，-20℃冰箱中保存?zhèn)溆?。連續(xù)注射7天后，于第8天上午8:00稱重后屠宰。屠宰時(shí)取血液分離血漿，-20℃保存。采用放射免疫法分析注射后2小時(shí)血漿中皮質(zhì)醇、ACTH、T3、T4、TNF噸的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程，采用氣相色譜質(zhì)譜系統(tǒng)（SHIMADZUGC/MSQP2010UItra/SE，Kyoto，JAPAN）對(duì)血液中的氨基酸及其他代謝

4、小分子物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ACTH注射后2h內(nèi)，實(shí)驗(yàn)組血漿中的皮質(zhì)醇、ACTH和T3水平均先顯著上升，在30-45min時(shí)達(dá)到峰值，之后逐漸下降，直至恢復(fù)正常水平。連續(xù)注射一周后檢測(cè)血漿中的皮質(zhì)醇，實(shí)驗(yàn)組低于對(duì)照組，其血液中T3、T4、生化指標(biāo)、度部分氨基酸均變化不明顯，但血液中的蘇氨酸水平比對(duì)照組顯著降低。
　　2ACTH與LPS注射對(duì)豬血液指標(biāo)及肝臟膽固醇代謝的影響
　　選取洋三元公豬24頭，體重為12±0.5kg。

5、按體重相近隨機(jī)分為4組:對(duì)照組，ACTH注射組，LPS注射組，ACTH和LPS聯(lián)合注射組。第一天上午9:00開(kāi)始注射，每6h注射一次，注射前禁食。對(duì)照組和LPS組肌肉注射生理鹽水，ACTH組與ACTH和LPS聯(lián)合注射組肌肉注射ACTH1-39，劑量為2.25IU/KGBW，用前稀釋為5IUACTH/ml。注射生理鹽水的體積與ACTH體積相同。連續(xù)注射2天ACTH后，在第3天上午9:00對(duì)LPS組及ACTH和LPS聯(lián)合注射組仔豬肌肉注射L

6、PS，劑量為15μg/kg體重.對(duì)照組和ACTH組注射相同體積的生理鹽水。注射LPS后6h屠宰采樣。采血制得血漿。取肝臟相同部位進(jìn)行肝臟石蠟組織切片制作。另取肝臟樣品凍存并檢測(cè)總膽固醇、總膽汁酸、膽固醇代謝相關(guān)基因和蛋白。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)ACTH注射對(duì)仔豬的肝臟形態(tài)影響不明顯，顯然血液中總膽固醇和甘油三脂顯著升高，但肝臟中與膽固醇代謝相關(guān)的基因表達(dá)未出現(xiàn)顯著性變化。而LPS注射組的仔豬肝臟受損嚴(yán)重，炎癥反應(yīng)劇烈，血液中皮質(zhì)醇和腫瘤壞

7、死因子的水平顯著升高，且肝臟膽固醇代謝相關(guān)的部分基因表達(dá)水平發(fā)生了極顯著的下降，表明其膽固醇代謝模式發(fā)生了很大的改變。
　　3不同豬場(chǎng)豬血液理化指標(biāo)及豬場(chǎng)養(yǎng)殖健康狀況分析
　　選取5個(gè)豬場(chǎng)對(duì)不同品種和不同日齡的豬進(jìn)行調(diào)查。并用頸靜脈采血分離血清。采用自動(dòng)生化分析儀（OLYMPUSAU2700）對(duì)血液常規(guī)生化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，血細(xì)胞常規(guī)采用血球儀(HB7021，SINNOWA)進(jìn)行檢測(cè)。參照歐盟WelfareQualityTM中的

8、評(píng)分規(guī)則對(duì)豬場(chǎng)的健康狀況進(jìn)行打分。
　　研究結(jié)果表明良好的飼養(yǎng)條件與豬血液中的紅細(xì)胞數(shù)目、HDL-C、淋巴細(xì)胞數(shù)目成正相關(guān)，與中性粒細(xì)胞數(shù)目、甘油三酯成負(fù)相關(guān);良好的圈舍條件與總膽固醇、LDL-C成正相關(guān);健康狀況與紅細(xì)胞數(shù)目、紅細(xì)胞壓積成正相關(guān)。紅細(xì)胞中的血紅蛋白具有攜帶氧氣的功能，良好的飼養(yǎng)和圈舍環(huán)境中生長(zhǎng)的豬，其血液中的紅細(xì)胞數(shù)目和血紅蛋白含量均較高。高密度脂蛋白所攜帶的膽固醇，即HDL-C是機(jī)體中的“好膽固醇”，它是逆向轉(zhuǎn)