在高植物蛋白飼料中添加膽固醇、?；撬岷痛蠖乖磉皩Υ罅怫疑L性能和膽固醇代謝的影響.pdf

1、以我國重要海水肉食性養(yǎng)殖魚類大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)為實驗對象，在室內流水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進行攝食生長實驗，研究高植物蛋白飼料中添加膽固醇、牛磺酸和大豆皂甙以及限飼水平對大菱鲆生長性能和膽固醇代謝的影響。在此基礎上探討植物蛋白降低魚類血漿膽固醇的機制。本文的研究內容和主要研究結果如下：
　　 1、高植物蛋白飼料中添加膽固醇對大菱鲆幼魚攝食、生長和膽固醇代謝的影響
　　 用添加膽固醇的高植物蛋白飼

2、料飼喂大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)幼魚9周，研究其對大菱鲆攝食、生長和膽固醇代謝的影響。實驗設計了5組等氮等脂飼料，以含魚粉58％的飼料作為基礎飼料(FM)，而其它4組飼料均含14.5％的魚粉、42.0％豆粕和18.5％谷朊粉，在這4組飼料中分別補充0.0％(C-0.0％)、0.5％(C-0.5％)、1.0％(C-1.0％)和1.5％(C-1.5％)的膽固醇，其實測值分別為0.30％、0.77％、1.25％和

3、1.78％，而基礎飼料中膽固醇檢測值為0.63％。結果表明，攝食飼料FM的大菱鲆增重率和飼料效率均顯著高于其它飼料組(P<0.05)。與C-0.0％組相比，攝食飼料C-1.0％組顯著提高了大菱鲆幼魚的攝食率、增重率和血漿及肝臟膽固醇水平(P<0.05)。與C-1.0％組相比，攝食飼料C-1.5％組顯著抑制了實驗魚的增重率和攝食率(P<0.05)。當飼料中膽固醇含量為1.25％(C-1.0％)時，其全魚脂肪含量最高，且顯著高于其它處理組(

4、P<0.05)。飼料中膽固醇含量與血漿中總膽固醇、游離膽固醇、膽固醇酯、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇的含量、肝臟中總膽固醇、膽固醇酯的含量及糞便中總膽固醇的含量呈顯著相關關系，相關系數均大于0.74。飼料中含有0.30％的膽固醇(C-0.0％)，其糞便總膽汁酸含量和肝臟膽固醇7A羥化酶的活性在所有處理組中最低。該研究結果表明，高植物蛋白飼料中含有1.25％的膽固醇有利于大菱鲆幼魚的生長，且對其生理狀態(tài)無不良影響。
　　

5、 2、大菱鲆HMG-CoAr基因的克隆、序列分析以及膽固醇添加到高植物蛋白飼料中對肝臟HMG-CoAr基因mRNA表達量的影響
　　 以大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)為實驗材料，利用同源克隆技術和RACE技術從大菱鲆肝臟中成功擴增出3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzyme A reductase，HMG-CoAr)cDNA的全序列。

6、HMG-CoAr基因cDNA全長序列為3048 bp(Genbank No：JN542428)，其中包括一個有2664 bp的開放閱讀框且編碼887個氨基酸，預測分子量約為96.52kDa，理論等電點為6.44。BLAST分析顯示大菱鲆HMG-CoAr基因與其它已知脊椎動物具有高度同源性，且N-端和C-端高度保守，僅連接N-端和C-端的中間疏水部分變異較大。序列分析指出HMG-CoAr基因在N-端氨基酸部分包括5個主要的跨膜域。實時定量

7、PCR技術檢測了全魚粉組(FM)、高植物蛋白組(C-0.0％)和高植物蛋白組基礎飼料中添加1.0％的膽固醇(C-1.0％)對大菱鲆肝臟HMG-CoAr基因mRNA表達量的影響。結果表明，與攝食全魚粉組相比(DietFM)，攝食高植物蛋白飼料(C-0.0％)能顯著上調大菱鲆肝臟HMG-CoAr基因mRNA的表達(P<0.01)。然而，當高植物蛋白飼料中補充1.0％的膽固醇則顯著抑制肝臟HMG-CoAr基因mRNA的表達量(P<0.01)。

8、該研究結果表明，充足的飼料膽固醇能夠顯著抑制HMG-CoAr基因mRNA的表達，膽固醇的合成受反饋調節(jié)機制控制。
　　 3、高植物蛋白飼料中添加膽固醇和?；撬釋Υ罅怫矣佐~攝食、生長、膽固醇代謝以及肝臟HMG-CoAr基因mRNA表達量的影響
　　 在高植物蛋白飼料中添加膽固醇、牛磺酸或同時添加膽固醇和?；撬嵫芯科鋵Υ罅怫?Scophthalmus maximus L.)幼魚生長性能和膽固醇代謝的影響。實驗基礎飼料(對照組

9、)包括14.5％的魚粉和50％的粗蛋白，在基礎飼料中分別添加1.0％?；撬?、1.0％膽固醇及1.0％膽固醇和1.0％牛磺酸的混合物(各組飼料分別命名為C-1.0％、T-1.0％和TC)，配制成等氮等脂的實驗飼料。實驗結果表明攝食飼料C-1.0％、T-1.0％和TC的大菱鲆增重率顯著高于對照組。其中攝食飼料TC的大菱鲆增重率最高，但與C-1.0％相比無顯著差異(P>0.05)。與攝食飼料C-1.0％相比，攝食飼料TC顯著降低了大菱鲆血漿總

10、膽固醇、游離膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量(P<0.05)。與對照組相比，攝食飼料C-1.0％能顯著提高實驗魚膽固醇7A羥化酶(CYP7A1)的活性(P＜0.05)，且攝食飼料T-1.0％CYP7A1活性最高。與攝食飼料C-1.0％相比，攝食飼料TC能顯著下調HMG-CoAr基因mRNA的表達量(P<0.05)。該研究結果表明，高植物蛋白飼料中添加1.0％膽固醇和1.0％的?；撬嵊欣诖罅怫业纳L。
　　 4、飼料中添加大豆皂甙

11、對大菱鲆幼魚攝食、生長和膽固醇代謝的影響
　　 本實驗旨在研究大豆皂甙對大菱鲆幼魚(Scophthalmus maxmus L.)攝食、生長和膽固醇代謝的影響。以魚粉飼料為基礎飼料(對照組，不添加大豆皂甙)，分別在對照飼料基礎上添加0.3％(實際含量為0.25％)和0.6％(實際含量為0.5％)的大豆皂甙產品，配制出另外的2組實驗飼料。3組飼料大豆皂甙的含量分別為0.0％(Diet1)、0.25％(Diet2)和0.5％(Die

12、t3)。結果表明，與對照組相比，飼料中添加0.25％的大豆皂甙(Diet2)對實驗魚的攝食率、飼料利用率和生長無顯著影響。但與對照組相比，飼料中添加0.5％的大豆皂甙顯著抑制了實驗魚的生長(P<0.05)。血漿、肝臟和糞便膽固醇代謝相關指標在各處理組間均無顯著差異。以上結果表明在魚粉為基礎的飼料中添加0.25％大豆皂甙對大菱鲆幼魚的生長沒有負面效應，而添加0.5％大豆皂甙則顯著抑制大菱鲆幼魚的生長。各組間實驗魚血漿、肝臟和糞便膽固醇含量

13、無顯著差異，這表明在魚粉為基礎的飼料中添加大豆皂甙對實驗魚膽固醇代謝無顯著影響。
　　 5、限飼水平對大菱鲆幼魚生長性能、膽固醇代謝以及肝臟HMG-CoAr基因表達的影響
　　 以初始體重為6.4±0.1 g的大菱鲆幼魚為實驗研究對象，探討限飼水平對大菱鲆幼魚生長性能和膽固醇代謝的影響。實驗分為4組，對照組以表觀飽食投喂，其它3組攝食率相應調整為表觀飽食的75％、50％和25％，并分別命名為100％組、75％組、50％組

14、和25％組。實驗結果表明，攝食率與大菱鲆增重率、血漿總膽固醇、游離膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇呈顯著的正相關關系(P<0.05)。而攝食率與肝臟總膽固醇、游離膽固醇及膽固醇酯呈顯著負相關關系(P＜0.05)。與對照組相比，25％組的?；o酶A：膽固醇酰基轉移酶(ACAT)活性顯著降低(P<0.05)，且其活性與攝食率呈顯著正相關關系(P<0.05)。與對照組相比，攝食表觀飽食50％或25％的實驗組顯著上調了3-羥基-3