低溫解除百合鱗莖休眠過(guò)程中抑制性差減cDNA文庫(kù)構(gòu)建及EST分析.pdf

1、百合是世界著名的球根花卉，具有自然休眠特性。百合鱗莖休眠的研究目前主要集中在低溫解除休眠過(guò)程中的形態(tài)變化和生理生化變化方面，而分子水平的研究尚是空白。本研究以麝香百合(Lilium longiflorum)為試材，構(gòu)建低溫解除百合鱗莖休眠過(guò)程中的抑制性差減cDNA文庫(kù)，并通過(guò)EST序列分析來(lái)預(yù)測(cè)文庫(kù)中差異表達(dá)基因的功能，篩選出了若干個(gè)可能參與百合鱗莖休眠解除的相關(guān)基因，為進(jìn)一步研究鱗莖休眠機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　

2、 1.麝香百合鱗莖經(jīng)7℃冷藏49-56d休眠解除；
　　 2.改進(jìn)的CTAB法提取百合鱗片RNA，將樣品量從0.2g減少到0.1g，β-巰基乙醇的含量從2%提高到4%，有效抑制了內(nèi)源RNase活性及酚類(lèi)物質(zhì)的氧化，成功地從百合鱗片中提得高質(zhì)量的總RNA；
　　 3.利用抑制性差減雜交技術(shù)(SSH)構(gòu)建了正反cDNA文庫(kù)。經(jīng)斑點(diǎn)雜交篩選、測(cè)序，正庫(kù)獲得了177條有效EST片段，130個(gè)unigenes。經(jīng)BLASTx和BL

3、ASTn比對(duì)發(fā)現(xiàn)92個(gè)unigenes有顯著相似性，占unigenes總數(shù)的70.77%，其中63個(gè)具已知或推測(cè)功能，占unigenes總數(shù)的48.46%，29個(gè)比對(duì)上但功能未知，加上38個(gè)unigenes比對(duì)無(wú)顯著相似性，總共67個(gè)unigenes可能為未經(jīng)報(bào)道的新基因，占unigenes總數(shù)的51.54%。同樣反庫(kù)獲得了233條有效EST片段，145個(gè)unigenes。經(jīng)BLASTx和BLASTn比對(duì)發(fā)現(xiàn)120個(gè)unigenes有顯

4、著相似性，占unigenes總數(shù)的82.76%，其中86個(gè)具已知或推測(cè)功能，占unigenes總數(shù)的59.31%，34個(gè)比對(duì)上但功能未知，加上25個(gè)unigenes比對(duì)無(wú)顯著相似性，總共59個(gè)unigenes可能為未經(jīng)報(bào)道的新基因，占unigenes總數(shù)的40.69%。
　　 4.休眠的解除是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，涉及到物質(zhì)代謝、信號(hào)傳導(dǎo)、抗逆、轉(zhuǎn)錄、能量代謝和蛋白合成等。本實(shí)驗(yàn)篩選到的可能參與低溫解除百合休眠的基因主要有Ca2+結(jié)合