DHV-1感染過程中凋亡相關基因的表達.pdf

1、鴨肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus，DHV)是一類小RNA病毒，能引起以肝炎為主要特征的雛鴨急性、高度致死性傳染病。1周齡內(nèi)雛鴨易感，死亡率高達95%，給我國養(yǎng)鴨業(yè)帶來了較大的經(jīng)濟損失。目前國內(nèi)外對鴨肝炎的研究主要集中在病毒基因組的測序和病毒的診斷技術(shù)等方面，對DVH發(fā)病機制和病毒感染過程中機體的應答機制等研究的報道尚不多見。
　　 本試驗通過分別感染4日齡和21日齡雛鴨，采用實時熒光定量PCR檢測感染過程中血

2、液中病毒含量的變化和相關凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Bcl-2在脾臟、法氏囊、肝臟和腎臟組織中表達的變化，通過TUNEL染色，觀察肝臟和脾臟細胞凋亡率的變化，研究細胞凋亡在鴨肝炎病毒感染機制中的作用。本研究主要完成了以下工作：
　　 (1)本試驗通過實時熒光定量PCR檢測4日齡和21日齡感染組雛鴨血清中病毒含量的變化，結(jié)果表明病毒含量的變化與肝細胞凋亡率的趨勢一致，在24 h感染后(p.i

3、.)最高，此時發(fā)生明顯的病理變化及細胞凋亡。而21日齡感染組雛鴨血清中病毒含量緩慢上升，病毒感染早期與細胞凋亡也有一定關系。
　　 (2)本試驗采用實時熒光定量PCR檢測4日齡雛鴨感染組脾臟、法氏囊、肝臟、腎臟組織中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Bcl-2 mRNA的變化。結(jié)果表明感染后脾臟中Caspase-8和Caspase-3表達呈上升趨勢，而Bcl-2的表達下調(diào)；法氏囊中Caspase-3和C

4、aspase-8表達成下降趨勢，而Bcl-2從感染后12h表達上調(diào)；肝臟中Bcl-2的表達逐漸下調(diào)，而Caspase-3、8、9在感染后表達無明顯上調(diào)趨勢；腎臟中Bcl-2的表達無明顯變化，而Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表達僅在感染后48h略有上調(diào)。
　　 (3)本試驗采用實時熒光定量PCR檢測21日齡雛鴨感染組脾臟、法氏囊、肝臟、腎臟組織中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-

5、9和Bcl-2 mRNA的變化。結(jié)果表明感染后48h內(nèi)Caspase-3、Caspase-8和Bcl-2在脾臟和法氏囊的表達先上調(diào)后下調(diào)，調(diào)控細胞凋亡的發(fā)生；與對照組比較肝臟中Caspase-8和Caspase-9的表達變化不大，在感染后6 h Bcl-2和Caspase-3表達上調(diào)。腎臟中Caspase-3的表達呈下降趨勢，而Bcl-2的表達在感染后12-24 h上調(diào)，且達到最大。Caspase-8和Caspase-9的表達無明顯變化

6、趨勢。
　　 (4)本試驗通過對4日齡和21日齡雛鴨的肝臟和脾臟進行TUNEL染色，結(jié)果表明4日齡感染雛鴨肝臟細胞凋亡率逐漸上升，24h達到最大值，顯著高于對照組；感染雛鴨脾臟細胞凋亡首先上升，6h后下降。21日齡感染雛鴨肝臟細胞凋亡率與對照組無明顯差異，但感染后48h顯著低于對照組；雛鴨脾臟細胞僅在感染后24h凋亡率顯著高于對照組。
　　 以上結(jié)果表明在鴨肝炎病毒感染4日齡雛鴨初期肝臟、脾臟和法氏囊均發(fā)生細胞凋亡，促進