?；蛆Z去氧膽酸抗小鼠肺纖維化作用的研究.pdf

1、肺纖維化是最常見(jiàn)的肺間質(zhì)疾病，也是呼吸系統(tǒng)最嚴(yán)重的疾病之一。它是一種以彌漫性肺泡炎和肺泡結(jié)構(gòu)紊亂并最終導(dǎo)致肺間質(zhì)纖維化為特征的疾病。迄今臨床治愈仍是一難題，尚無(wú)一種令人滿意的治療方法。?；蛆Z去氧膽酸(Taurochenodeoxycholic acid，TCDCA)是存在于動(dòng)物膽汁中的一種無(wú)臭、白色粉末、味極苦的結(jié)合型膽汁酸。關(guān)于膽汁酸及其有效成分的研究近些年引起了廣泛關(guān)注，至從1999年和2003年分別發(fā)現(xiàn)了膽汁酸的兩個(gè)受體FXRα(

2、Makishima et al，1999)和TGR5(Kawamata et al，2003)之后，膽汁酸已被視為信號(hào)分子或激素(Hylemon PB et al，2009)，在機(jī)體內(nèi)分泌調(diào)節(jié)(Katsuma S et al，2005；Keitel V，2008)、能量代謝(Watanabe M et al，2006)、促進(jìn)肝臟再生(Huang W et al，2006)及抗纖維化等方面發(fā)揮著重要作用。于2005年和2007年又相繼證實(shí)

3、FXRα激動(dòng)劑GW4064和膽酸能夠降促進(jìn)肝臟纖維溶解發(fā)生纖維化逆轉(zhuǎn)(Fiorucci S et al，2005)并且能對(duì)腎臟起到保護(hù)作用(Jiang T et al，2007)。目前研究證實(shí)在人的肺臟同時(shí)存在FXRα和TGR5兩種膽汁酸受體的表達(dá)(Kawamata Y et al，2003：Andrea B et al，2005)。是否同樣具有抗肺臟纖維化作用尚無(wú)報(bào)道。本研究經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)小鼠肺臟也同時(shí)表達(dá)FXRα和TGR5兩種受體，所以

4、在此以小鼠作為研究對(duì)象制備肺纖維化模型，開(kāi)展了TCDCA抗小鼠肺纖維化作用的研究，希望為今后將TCDCA開(kāi)發(fā)成為抗肺纖維化藥物提供依據(jù)。
　　 本文采用博來(lái)霉素制備了小鼠肺纖維化模型(M.Gharaee-Kermani et al，2005；M.Gharaee-Kermani et al，2011)，開(kāi)展了TCDCA抗肺纖維化作用的研究。在實(shí)驗(yàn)中將其隨機(jī)分成5組，每組16只，分別為正常組、肺纖維化模型組和高、中、低三個(gè)劑量的TC

5、DCA給藥組，給藥劑量分別為0.05g/kg、0.1/kg、0.2mg/kg。造模成功后進(jìn)行灌胃給藥，每日1次，持續(xù)三周，模型組和空白組灌服生理鹽水。實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了小鼠肺臟膽汁酸受體FXRα和TGR5表達(dá)，以及TCDCA分別對(duì)肺纖維化小鼠體重、剖解、肺系數(shù)、病理組織學(xué)和TNF-α、MMP-2、MMP-9和TIMP-2表達(dá)的影響。
　　 首先試驗(yàn)檢測(cè)了膽汁酸受體FXRα和TGR5在大鼠、小鼠、豚鼠各器官中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示TGR5在

6、大鼠、小鼠、豚鼠各器官中均有穩(wěn)定的大量表達(dá)，而FXR只在小鼠肺臟中含量較多，在大鼠中表達(dá)量極少在豚鼠肺中表達(dá)也不穩(wěn)定。小鼠按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)處理，發(fā)現(xiàn)中劑量可以明顯增加小鼠體重。剖檢后模型組和高劑量組肺葉病變嚴(yán)重，有灰白色纖維素性滲出物覆蓋。肺表面及切面上可見(jiàn)多數(shù)散在性實(shí)變病灶，且有膿性分泌物。中劑量，和低劑量組雖有部分病變，但較正常組變化不明顯。較模型組有較大改善。肺系數(shù)的結(jié)果顯示模型組和高劑量組肺系數(shù)顯著升高，中劑量和低劑量組得到改善，由此

7、進(jìn)一步證明了肺臟的剖檢變化的情況。試驗(yàn)又通過(guò)由對(duì)肺組織的HE和Masson染色，對(duì)病理切片進(jìn)行了進(jìn)一步觀察?？煽闯隹梢钥闯瞿Ｐ徒M和高劑量組肺泡內(nèi)充滿大量炎性滲出物，肺泡實(shí)變。肺泡腔充有大量增生毛細(xì)血管和成纖維細(xì)胞，正常肺組織結(jié)構(gòu)消失。高劑量組在部分肺泡腔實(shí)變過(guò)程中伴隨有周邊肺泡腔代償性肺氣腫。而中劑量組和低劑量組雖有少量炎性滲出物，但較模型組明顯減輕。肺組織結(jié)構(gòu)及輪廓猶在并未喪失其功能。試驗(yàn)還通過(guò)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)肺臟內(nèi)MMP-2、M