大豆轉錄因子基因GmJERF3s和耐鹽基因GmIMTs的克隆與初步功能分析.pdf

1、病害、干旱、鹽堿等逆境脅迫是限制植物生長發(fā)育的重要因子，也是影響作物產量的主要脅迫因素，克隆抗病抗逆相關基因并利用這些基因改良作物的抗病抗逆性具有重要的意義。ERF轉錄因子廣泛存在于不同的物種中，如:擬南芥、煙草、水稻和番茄等，參與調控干旱、高鹽、低溫、病害和細胞發(fā)育相關的基因表達，轉錄因子作為調控基因能夠調控一個或多個下游功能基因的表達，從而使轉基因植物獲得綜合抗病抗逆能力，因此克隆和轉化這些轉錄因子具有較高的應用價值。主要研究結果如

2、下:
　　 1.使用同源克隆的方法，以番茄轉錄因子JERF3核苷酸序列為探針，通過Blast在大豆EST網(wǎng)站搜索同源基因片段并在大豆基因組庫中拼接成目的基因，從大豆品種齊黃22葉片的cDNA中克隆了3個大豆GmJERF3s轉錄因子。GmJERF3a的cDNA序列全長1，356 bp，包含一個長為1，038 bp的開放閱讀框，編碼345個氨基酸。GmJERF3b的cDNA序列全長1，322 bp，開放閱讀框為1，149個堿基，編碼

3、382個氨基酸，GmJERF3c的cDNA序列全長1，556 bp，包含一個長為1，179 bp的開放閱讀框，編碼392個氨基酸。GmJERF3s基因的表達分析，GmJERF3s與MtERF的親緣關系較近，且其氨基酸序列的同源性為99％。使用熒光定量PCR方法，組織表達分析發(fā)現(xiàn)，GmJERF3s基因在25 DAF的根部和葉片中表達量比較高，而在其它時期的組織中幾乎不表達。
　　 2.從大豆中克隆得到GmIMTs兩個耐鹽基因，Gm

4、IMT1的cDNA序列全長1，208bp，包含一個長為1，098 bp的開放閱讀框，編碼365個氨基酸，GmIMT2的cDNA序列全長1，138 bp，包含一個長為1，098 bp的開放閱讀框，編碼365個氨基酸。序列分析表明，GmIMTs與Aaimt和Llimt的親緣關系較近，且其氨基酸序列的同源性為99％。使用熒光定量PCR方法，組織表達分析發(fā)現(xiàn)，GmIMTs基因在根和葉子的中表達量比較高，而在種子中表達量很低。
　　 3.

5、使用Gateway技術構建GmJERF3s三個過量表達載體pEarlygate-GmJERF3a、pEarlygate-GmJERF3b和 pEarlygate-GmJERF3c，和兩個過量表達載體pEarlygate-GmIMT1和pEarlygate-GmIMT2。通過農桿菌介導法將GmJERF3s和GmIMTs轉入模式植物擬南芥中，經過除草劑Bar的篩選，得到了T1代陽性苗。對得到的轉基因植株進行PCR檢測，均擴增出了預期條帶，表