對蝦白斑綜合癥病毒（WSSV）囊膜蛋白VP28與對蝦鰓細(xì)胞膜蛋白的分離和結(jié)合活性分析.pdf

1、中國海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文對蝦白斑綜合癥病毒（WSSV）囊膜蛋白VP28與對蝦鰓細(xì)胞膜蛋白的分離和結(jié)合活性分析姓名：解飛霞申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：海洋生物指導(dǎo)教師：徐懷恕黃倢2003.6.1對蝦白斑綜合癥病毒(wssv)囊膜蛋白vP28與對蝦鰓細(xì)胞膜蛋白的分離和結(jié)合活性分析對蝦鰓細(xì)胞膜的結(jié)合活性最高，在低于或高于1M時(shí)都會(huì)對蝦鰓細(xì)胞膜的結(jié)臺(tái)活性受到影響；超聲波對蝦鰓細(xì)胞膜的活性影響較大，作用時(shí)間50s就可使對蝦鰓細(xì)胞膜的活性喪失。共選用了

2、5種表面活性劑處理對蝦鰓細(xì)胞膜，包括Tween20、NP40、TritonX100、脫氧膽酸鈉、SDS(十二烷基磺酸鈉)，作用濃度均為2％。前4種表面活性劑對結(jié)合活性有影響但不能使結(jié)合活性完全喪失，而SDS可使對蝦鰓細(xì)胞膜的活性喪失。在上述各種表面活性劑中加入了01M二硫蘇糖醇，實(shí)驗(yàn)結(jié)果區(qū)別很小，證實(shí)二硫蘇糖醇對對蝦鰓細(xì)胞膜的結(jié)合活性既沒有起到保護(hù)的作用也沒有起到破壞的作用。隨著蔗糖濃度的加大，對蝦鰓細(xì)胞膜的結(jié)合活性也隨著下降，但是當(dāng)蔗

3、糖濃度達(dá)到62％時(shí)，對蝦鰓細(xì)胞膜的結(jié)合活性仍然沒有完全喪失。在有機(jī)溶劑中，三氯乙酸可使對蝦鰓細(xì)胞膜的結(jié)合活性喪失，乙醇、丙酮可使對蝦鰓細(xì)胞膜的結(jié)合活性有所下降，但不能完全喪失。經(jīng)2％Tween20處理的對蝦鰓細(xì)胞膜，CMSepharoseFF離子交換層析，得到3個(gè)洗脫峰；合并濃縮后測定與WSSV的結(jié)合活性，并將活性組分進(jìn)行sDsP：AGE得到其蛋白多肽圖譜。2％Tween20處理后的對蝦鰓細(xì)胞膜經(jīng)過SephadcxG75凝膠過濾層析濃縮

4、后測定與WSSV的結(jié)合活性，將得到的活性與蛋白量之比的最高峰進(jìn)行SDSPAGE得到其蛋白多肽圖譜。將離子交換的活性組分多肽圖譜與凝膠過濾的活性組分多肽圖譜相比較，得出分子量約為53KD的對蝦鰓細(xì)胞膜蛋白具有與WSSV結(jié)合的活性。將對蝦鰓細(xì)胞膜與不同濃度的肝素鈉混合，室溫放置3h，發(fā)現(xiàn)對蝦鰓細(xì)胞膜不再具有與WSSV結(jié)合的能力。將病毒與不同濃度的肝素鈉混合放置同樣的時(shí)間，卻并未使病毒喪失與對蝦鰓細(xì)胞膜結(jié)合的能力。從而推斷肝素鈉能夠與病毒競爭