β-葡萄糖苷酶基因在畢赤酵母中的誘導(dǎo)表達.pdf

1、論文以獲得高活力外源β-葡萄糖苷酶及開發(fā)利用發(fā)酵液殘渣酵母為目標，以基因工程菌GS115 bgl1為菌株，研究了β-葡萄糖苷酶誘導(dǎo)表達的適宜條件及其酶學(xué)特性；在此基礎(chǔ)上，進行了5L發(fā)酵罐放大發(fā)酵實驗；并就如何利用發(fā)酵液中的酵母進行了探索性的研究。結(jié)果表明：
　　 基因工程菌GS115 bgl1誘導(dǎo)表達β-葡萄糖苷酶的適宜條件為：FM21培養(yǎng)基的pH為6.0，組氨酸和PTM1的加入量分別為0.1％和0.4％，接種量為6％，每24h

2、添加一次1％甲醇。此外，添加硫酸銨，磷酸二氫鉀，Tween80，油酸可提高β-葡萄糖苷酶的酶活。
　　 發(fā)酵罐的高密度發(fā)酵結(jié)果表明，甲醇誘導(dǎo)72h后，β-葡萄糖苷酶活可達145 IU/mL，蛋白表達量可達7500mg/L。與搖瓶相比，最高酶活及胞外蛋白表達量分別提高了1.87倍和1.79倍，是出發(fā)菌株黑曲霉產(chǎn)酶能力的33.6倍，實現(xiàn)了β-葡萄糖苷酶的高效表達。
　　 利用濃鹽法提取發(fā)酵液殘渣酵母中的核酸時，核酸得率為1.