MMP-2對ET-1誘導的肉雞肺動脈平滑肌細胞增殖的調控及其在PHS肉雞肺血管重構中的作用.pdf

1、肉雞肺動脈高壓綜合征(pulmonary hypertension syndrome，PHS)是危害肉雞養(yǎng)殖業(yè)的主要代謝性疾病之一。近年來的研究表明，肺血管重構是PHS的重要病理學變化特征。肺血管重構以肺小動脈管腔狹窄、中膜肥厚以及非肌型動脈肌性化為特征，這一結構性改變是導致肺動脈高壓得以維持并呈進行性發(fā)展的關鍵因素。肺動脈平滑肌細胞(pulmonary arteriole smooth muscle cells，PASMCs)過度增殖

2、是造成PHS肉雞肺血管病理性重構的重要原因，但引起這一改變的病理生理機制尚不十分明確。本研究的目的在于揭示ET-1在PHS肉雞肺血管重構機制中的作用及其調控機制。
　　 試驗一，ET-1對肉雞肺動脈平滑肌細胞增殖的促進作用及其受體途徑。培養(yǎng)PASMCs，采用四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法觀察ET-1對肉雞肺動脈平滑肌細胞體外增殖的刺激作用，并觀察內皮素A受體(ETAR)拮抗劑BQ123和B受體(ETBR)拮抗劑BQ788對ET-

3、1作用下的肉雞PASMCs增殖的影響。結果，ET-1可顯著刺激肉雞PASMCs增殖(P<0.05)，這一效應可被BQ123阻斷；BQ788對ET-1刺激的PASMCs增殖無顯著影響(P>0.05)。
　　 試驗二，MMP-2對ET-1誘導的肉雞PASMCs增殖的調控作用。分離培養(yǎng)肉雞肺動脈平滑肌細胞(PASMCs)，將細胞分為ET-1組、ET-1+基質金屬蛋白酶抑制劑-2(TIMP-2)組、ET-1+Doxycycline(Do

4、xy)組和正常生長對照組，MTT比色法觀察各組中細胞增殖情況。采用RT-PCR法檢測MMP-2 mRNA表達采用明膠酶譜法檢測培養(yǎng)上清中基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)活性。結果顯示，ET-1可顯著刺激PASMCs增殖(P<0.05)，其促PASMCs增殖的作用可被MMP-2抑制劑TIMP-2和Doxy抑制(P<0.05)。在ET-1作用下，MMP-2 mRNA表達和酶活性均較對照組顯著升高(P<0.05)；TIMP-2和Doxy均可顯

5、著抑制MMP-2mRNA表達及MMP-2的活性(P<0.05)。
　　 試驗三，選取PHS患雞和健康肉雞各10只，采取肺組織制成石蠟切片，采用Verhoeff氏鐵蘇木素染色法進行彈性纖維染色，測定直徑<60μM的肺細小動脈的平均中膜厚度(mMTPA)和管壁/管總面積(WA/TA)，以其作為反映肺血管重構的指標。免疫組織化學方法檢測肺小動脈中MMP-2的表達。結果顯示，PHS肉雞肺小動脈mMTPA和WA/TA值較健康肉雞顯著升高(

6、P<0.05)，MMP-2表達亦顯著上調(P<0.01)，MMP-2表達與WA/TA和mMTPA呈正相關，相關系數r分別為0.928(P<0.01)、0.816(P<0.01)。
　　 結論：
　　 1.本研究結果表明，ET-1對體外培養(yǎng)的肉雞PASMCs具有強烈的增殖促進作用，提示其在PHS肉雞肺血管重構形成機制中的作用可能與其直接刺激血管平滑肌細胞增殖有關。
　　 2.ET-1對PASMCs增殖促進作用受MM