TSH方法識(shí)別馬鈴薯塊莖器官發(fā)生基因及其表達(dá)分布研究.pdf

1、莖是高等植物的重要器官之一，馬鈴薯匍匐莖及塊莖是莖的天然變異，揭示其發(fā)生機(jī)制，不僅對馬鈴薯莖器官發(fā)生、而且對以莖器官為收獲對象的作物的相關(guān)研究具有重要的參考價(jià)值，然而，匍匐莖及塊莖變異形成的分子機(jī)理及調(diào)控方式至今尚屬未知。
　　 本研究以不同成熟期馬鈴薯的匍匐莖和塊莖RNA為材料，構(gòu)建匍匐莖及塊莖的消減cDNA文庫，以期識(shí)別其形成特異表達(dá)基因，而后檢測特異表達(dá)基因在不同基因型不同器官、發(fā)育階段中表達(dá)，確定其表達(dá)分布特點(diǎn)，為最終揭

2、示塊莖發(fā)生分子機(jī)理奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　 1、以兩基因型匍匐莖RNA為檢測組(tester)或驅(qū)動(dòng)組(driver)、塊莖RNA為驅(qū)動(dòng)組(driver)或檢測組(tester)，通過轉(zhuǎn)錄子消減雜交(TSH)，構(gòu)建了匍匐莖和塊莖消減cDNA文庫各2個(gè)，菌落觀察統(tǒng)計(jì)及其后的檢測結(jié)果顯示，文庫中重組率為95%左右，滿足文庫質(zhì)量要求。
　　 2、對文庫進(jìn)行菌落PCR篩選，隨機(jī)挑取142個(gè)白色克隆分析發(fā)現(xiàn)117個(gè)為陽性

3、結(jié)果，陽性率為82.4%，文庫插入片段在100bp-1000bp之間；對42個(gè)陽性克隆進(jìn)行了測序，序列經(jīng)生物信息學(xué)分析，得到唯一非重復(fù)的EST序列21個(gè)。
　　 3、經(jīng)GenBank數(shù)據(jù)庫blastx和blastn對21個(gè)EST進(jìn)行了同源性比對，結(jié)果顯示匍匐莖及塊莖消減文庫中，未識(shí)別且功能未知基因分別為26.7%和66.7%，已知功能基因涉及信號傳導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白合成代謝、生物與非生物脅迫等過程。
　　 4、RT-PC