腦脊液與血清中h2s、no水平對(duì)患兒不同病原顱內(nèi)感染的鑒別意義

1、<p><b>　　分類號(hào)</b></p><p><b>　　UDC</b></p><p><b>　　密級(jí)</b></p><p><b>　　編號(hào)</b></p><p><b>　　碩士學(xué)位論文</b></p

2、><p>　　腦脊液與血清中 H2S、NO水平對(duì)患兒</p><p>　　不同病原顱內(nèi)感染的鑒別意義</p><p><b>　　研 究 生 姓 名</b></p><p><b>　　： 胡擎鵬</b></p><p>　　指導(dǎo)教師姓名、職稱 ： 湯永紅 教授</p>

3、;<p>　　學(xué) 科、專 業(yè) 名 稱 ： 神經(jīng)病學(xué)</p><p><b>　　研</b></p><p><b>　　究</b></p><p><b>　　方</b></p><p><b>　　向</b></p><

4、p><b>　?。?顱內(nèi)感染</b></p><p>　　2014 年 12 月</p><p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p>　　南華大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明</p><p>　　本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究</p>&l

5、t;p>　　成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已</p><p>　　經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南華大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使</p><p>　　用過的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說</p><p>　　明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。</p>

6、;<p><b>　　作者簽名：</b></p><p><b>　　年</b></p><p><b>　　月</b></p><p><b>　　日</b></p><p>　　南華大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書</p><

7、;p>　　本學(xué)位論文是本人在南華大學(xué)攻讀碩士學(xué)位期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的學(xué)位論</p><p>　　文。本論文的研究成果歸南華大學(xué)所有，本論文的研究?jī)?nèi)容不得以其它單位的名義發(fā)</p><p>　　表。本人同意南華大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文，</p><p>　　允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)校可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采

8、用復(fù)</p><p>　　印、縮印或其它手段保留學(xué)位論文；學(xué)?？筛鶕?jù)國(guó)家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位</p><p>　　論文。同意學(xué)校將論文加入《中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》，并按《中國(guó)優(yōu)</p><p>　　秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)出版章程》規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。同意授權(quán)中國(guó)科學(xué)信息</p><p>　　技術(shù)研究所將本學(xué)位論文收錄到《

9、中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公</p><p>　　眾提供信息服務(wù)。對(duì)于涉密的學(xué)位論文，解密后適用該授權(quán)。</p><p><b>　　作者簽名：</b></p><p><b>　　導(dǎo)師簽名：</b></p><p><b>　　年</b></p>

10、<p><b>　　月</b></p><p><b>　　日</b></p><p><b>　　年</b></p><p><b>　　月</b></p><p><b>　　日</b></p><

11、p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p><b>　　目</b></p><p><b>　　錄</b></p><p>　　主要英文縮略索引…………………………………………………… 1</p><p>　　中文摘要………………………………………………………………

12、 2</p><p>　　英文摘要…………………………………………………………… 4</p><p>　　論文正文…………………………………………………………… 7</p><p>　　前言……………………………………………………………… 7</p><p>　　對(duì)象與方法………………………………………………………… 9</p>

13、<p>　　結(jié)果……………………………………………………………… 16</p><p>　　討論……………………………………………………………… 22</p><p>　　結(jié)論……………………………………………………………… 25</p><p>　　參考文獻(xiàn)………………………………………………………… 26</p><p>　　

14、綜述……………………………………………………………… 28</p><p>　　綜述參考文獻(xiàn)…………………………………………………… 34</p><p>　　攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文 ……………………………… 35</p><p>　　致謝……………………………………………………………………36</p><p><b>　　萬(wàn)方

15、數(shù)據(jù)</b></p><p><b>　　主要英文縮略語(yǔ)索引</b></p><p><b>　　縮寫</b></p><p><b>　　CNSI</b></p><p><b>　　H2S</b></p><p>&

16、lt;b>　　NO</b></p><p><b>　　英文全稱</b></p><p>　　central nervous system infection</p><p>　　hydrogensulfide</p><p>　　nitric oxide</p><p><

17、;b>　　中文名稱</b></p><p><b>　　中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染</b></p><p><b>　　硫化氫</b></p><p><b>　　一氧化氮</b></p><p><b>　　ELISA</b></p>

18、<p>　　enzyme-linked immunosorbentassay 酶聯(lián)免疫反應(yīng)</p><p><b>　　CSF</b></p><p><b>　　PM</b></p><p><b>　　TM</b></p><p><b>　　VE&

19、lt;/b></p><p><b>　　FeC13</b></p><p><b>　　CBS</b></p><p><b>　　CSE</b></p><p><b>　　3MST</b></p><p><b&g

20、t;　　NOS</b></p><p>　　cerebrospinal fluid</p><p>　　Purulent meningitis</p><p>　　Tuberculous meningitis</p><p>　　Viral encephalitis</p><p>　　trichlorid

21、e ferric</p><p>　　cystathionine-β-synthase</p><p>　　cystathionine-γ-lyase</p><p>　　3-mercaptopyruvate transsulphurase</p><p>　　nitric oxide synthase</p><p>

22、;<b>　　腦脊液</b></p><p><b>　　化膿性腦膜炎</b></p><p><b>　　結(jié)核性腦膜炎</b></p><p><b>　　病毒性腦炎</b></p><p><b>　　三氯化鐵</b></p

23、><p><b>　　胱硫醚-β-合酶</b></p><p><b>　　胱硫醚-γ-裂解酶</b></p><p>　　3-巰基丙酮酸轉(zhuǎn)硫酶</p><p><b>　　一氧化氮合酶</b></p><p><b>　　BBB</b>

24、;</p><p>　　brain-blood</p><p><b>　　barrier,</b></p><p><b>　　血腦屏障</b></p><p><b>　　1</b></p><p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b>

25、</p><p>　　腦脊液與血清中 H2S、NO 水平對(duì)患兒不同病原</p><p><b>　　顱內(nèi)感染的鑒別意義</b></p><p><b>　　摘要</b></p><p><b>　　目的：</b></p><p>　　在小兒顱內(nèi)感染中，通

26、過檢測(cè)血清及腦脊液中 H2S、NO 的含量，探討 H2S、NO 在</p><p>　　三種不同類型小兒顱內(nèi)感染中的改變，探索快速有效的檢測(cè)輔助診斷手段，以鑒別不</p><p>　　同病原顱內(nèi)感染，指導(dǎo)臨床的診斷及治療，最大程度改善預(yù)后和減少腦損傷。</p><p><b>　　方法：</b></p><p>　　采用

27、雙抗體夾心 ELISA 法和 ELISA 酶聯(lián)免疫法對(duì) 68 例中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染(CNSI)</p><p>　　患兒的血清和腦脊液中的 H2S、NO 水平分別進(jìn)行檢測(cè),其中病毒性腦炎 30 例，結(jié)核性</p><p>　　腦膜炎 16 例，化膿性腦膜炎 22 例和非顱內(nèi)感染對(duì)照組 20 例，然后將顱內(nèi)感染患兒</p><p>　　血清和腦脊液中 NO 和 H2S

28、含量與非顱內(nèi)感染患兒組之間進(jìn)行分析比較，以及不同類</p><p>　　型顱內(nèi)感染患兒血清和腦脊液中 NO 和 H2S 的變化水平比較，探討不同顱內(nèi)感染患兒</p><p>　　血清和腦脊液中 NO 和 H2S 含量的變化及 NO 和 H2S 在顱內(nèi)感染發(fā)病中的相互作用，尋</p><p>　　找快速檢測(cè)輔助診斷手段，以鑒別不同病原體顱內(nèi)感染，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)處理采用&

29、lt;/p><p>　　SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)軟件，P<0.05 為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。</p><p><b>　　結(jié)果：</b></p><p>　　1．顱內(nèi)感染組患兒腦脊液中 H2S 水平表現(xiàn)為化膿性腦膜炎組最高、結(jié)核性腦膜</p><p>　　炎組次之、病毒性腦炎組最低,數(shù)據(jù)如下：①化膿性腦膜炎組 46.4±

30、;7.4μmol/L,與</p><p>　　對(duì)照組比較，P=0.001;②結(jié)核性腦膜炎組 33.6±5.7μmol/L，與對(duì)照組比較，P=0.003;</p><p>　?、鄄《拘阅X炎組 13.3±2.2μmol/L，與對(duì)照組比較，P＞0.05;，化腦組及結(jié)腦組明</p><p>　　顯高于對(duì)照組 10.8±2.4μmol/L；病腦組

31、無(wú)明顯升高；顱內(nèi)感染組組間差異具有顯</p><p><b>　　著性。</b></p><p><b>　　2</b></p><p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p>　　2. 顱內(nèi)感染組患兒腦脊液中 NO 水平表現(xiàn)為結(jié)核性腦膜炎組最高、化膿性腦膜炎</p

32、><p>　　組次之、病毒性腦炎組最低,數(shù)據(jù)如下：①結(jié)核性腦膜炎組 105.3±9.7μmol/L，與</p><p>　　對(duì)照組比較，P=0.001;②化膿性腦膜炎 97.3±10.7μmol/L 與對(duì)照組比較，P=0.002;</p><p>　?、鄄《拘阅X炎組 86.2±5.8μmol/L，與對(duì)照組比較，P=0.005；均顯著高于對(duì)照

33、組 35.9</p><p>　　±5.4μmol/L，且顱內(nèi)感染組組間差異具有顯著性；</p><p>　　3. 顱內(nèi)感染組患兒血清中 H2S 水平數(shù)據(jù)如下：①化膿性腦膜炎組 89.4±6.5μ</p><p>　　mol/L，與對(duì)照組比較，P=0.001;②結(jié)核性腦膜炎 83.3±6.8μmol/L,與對(duì)照組比較，</p>

34、;<p>　　P=0.005;③病毒性腦炎組 34.5±5.3μmol/L, 與對(duì)照組比較，P>0.05;化腦組及結(jié)腦</p><p>　　組明顯高于對(duì)照組 31.0±5.7μmol/L；結(jié)核性腦膜炎及化膿性腦膜炎組明顯高于病</p><p>　　腦組，病毒性腦炎組無(wú)明顯升高。</p><p>　　4. 顱內(nèi)感染組患兒血清中

35、NO 水平數(shù)據(jù)如下：①結(jié)核性腦膜炎組 76.2±7.7μ</p><p>　　mol/L,與對(duì)照組比較，P=0.001;②化膿性腦膜炎組 63.3±5.1μmol/L,與對(duì)照組比</p><p>　　較，P=0.002③病毒性腦炎組 45.7±5.3μmol/L，明顯高于對(duì)照組 21.8±5.2μmol/L，</p><p>

36、　　P=0.005；組組間差異具有顯著性。</p><p><b>　　結(jié)論：</b></p><p>　　1、顱內(nèi)感染血清和腦脊液中 H2S、NO 水平均增高，提示內(nèi)源性 H2S、NO 可能參</p><p>　　與了顱內(nèi)感染的發(fā)生與發(fā)展過程；</p><p>　　2、在結(jié)核性腦膜炎、化膿性腦膜炎和病毒性腦炎中，腦脊液

37、和血清中的H2S、NO</p><p>　　水平有顯著差異，提示其檢測(cè)對(duì)不同病原顱內(nèi)感染的診斷和鑒別診斷有重要價(jià)值。</p><p>　　關(guān)鍵詞：硫化氫；一氧化氮;</p><p>　　腦脊液；血清；顱內(nèi)感染; 兒童；</p><p><b>　　3</b></p><p><b>　　

38、萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p>　　Clinical Significance of the Changes of H2S、NO in Serum and</p><p>　　Cerebrospinal Fluid in Children with different types of</p><p>　　Intracranial Infection&

39、lt;/p><p><b>　　Abstract</b></p><p>　　Objective：</p><p>　　In children with intracranial infection, through inspecting the content of H2S and NO</p><p>　　in seru

40、m and cerebrospinal fluid, probe into the content change of H2S and NO in the three</p><p>　　different types of intracranial infection in order to detect the diagnostic method of fast and</p><p>

41、;　　effective to identify the different pathogens encephalitis, guide the clinical diagnosis and</p><p>　　treatment，improve the prognosis and reduce brain damage the greatest degree.</p><p><b

42、>　　Methods:</b></p><p>　　Sixty-eight children suffered from CNSI infection whose concentration of H2S、NO in</p><p>　　serum and cerebrospinal fluid (CSF) were determined with double anti

43、body sandwich</p><p>　　method and enzyme-linked immunosorbent assay. They included 30 viral encephalitis, 22</p><p>　　purulent meningitis, 16 tubercular meningitis, and 20 non-CNS disease as the

44、 control</p><p>　　group， then analyzed and compared the content of NO and H2S in CSF and serum with</p><p>　　the non intracranial infection and intracranial infection children group , and compar

45、ed the</p><p>　　levels of NO and H2S in serum and CSF in order to probe the changes and interaction of</p><p>　　NO and H2S in different types of intracranial infection children and look for the

46、rapid</p><p>　　detection of diagnostic method to identify the different intracranial infection. Results were</p><p>　　analyzed by SPSS 20.0. There was statistical difference when P<0.05.</

47、p><p><b>　　Results:</b></p><p>　　1. With intracranial infection children,the levels of H2S in the cerebrospinal fluid were</p><p>　　performed and purulent meningitis was th

48、e highest, followed by tuberculous meningitis</p><p><b>　　4</b></p><p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p>　　group, viral encephalitis group was the lowest, the data are as

49、 follows: ①Purulent</p><p>　　meningitis group was 46.4±7.4μmol/L, P=0.001 compared with the control group;②</p><p>　　Tuberculous meningitis group was 33.6± 5.7μ mol/L, P=0.003 compared

50、 with the</p><p>　　control group; ③Viral encephalitis group was 13.3±2.2μmol/L, compared with control</p><p>　　group, P > 0.05; the tuberculous meningitis and purulent meningitis group w

51、ere obviously</p><p>　　higher than the control group 10.8±2.4μmol/L; However,there is no obvious difference in</p><p>　　viral encephalitis group , and the differences in each intracranial i

52、nfection group were also</p><p>　　significant .</p><p>　　2. With intracranial infection children,the levels of NO in the cerebrospinal fluid were</p><p>　　performed and tuberculous

53、meningitis group was the highest, followed by purulent</p><p>　　meningitis group, viral encephalitis group was the lowest, the data are as follows:</p><p>　?、賂uberculous meningitis group was 105

54、.3±9.7μmol/L,P=0.001 compared with the control</p><p>　　group; ②Purulent meningitis group was 97.3±10.7μ mol/L,P=0.002 compared with the</p><p>　　control group; ③Viral encephalitis gro

55、up was 86.2±5.8μmol/L,P=0.005 compared with the</p><p>　　control group;significantly higher than that of control group 35.9±5.4μmol/L group, and</p><p>　　the differences in each group

56、were also significant.</p><p>　　3. With intracranial infection children,the levels of H2S in serum were performed and</p><p>　　purulent meningitis was the highest, followed by tuberculous mening

57、itis group, viral</p><p>　　encephalitis group was the lowest, the data are as follows: ①Purulent meningitis group</p><p>　　was 89.4±6.5μmol/L,P=0.001 compared with the control group;②Tuberc

58、ulous meningitis</p><p>　　group was 83.3 ± 6.8μmol/L.P=0.005 compared with the control group; ③ Viral</p><p>　　encephalitis group was 34.5 ±5.3 μmol/L, P>0.05 compared with the cont

59、rol group, the</p><p>　　tuberculous meningitis and purulent meningitis group were obviously higher than the viral</p><p>　　encephalitis group ; and there is no obvious difference in viral enceph

60、alitis group .</p><p><b>　　.</b></p><p>　　4. With intracranial infection children,the levels of NO in serum were performed and</p><p>　　tuberculous meningitis group was

61、the highest, followed by purulent meningitis group, viral</p><p><b>　　5</b></p><p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p>　　encephalitis group was the lowest, the data are as

62、follows: ①Tuberculous meningitis</p><p>　　group was 76.2± 7.7μmol/L, P=0.001 compared with the control group;② Purulent</p><p>　　meningitis group was 63.3±5.1μmol/L P=0.002 compared wi

63、th the control group;③Viral</p><p>　　encephalitis group was 45.7 ±5.3μmol/L, P=0.005 compared with the control group;</p><p>　　significantly higher than that of control group 21.8±5.2μ

64、mol/L , and the differences in each</p><p>　　group were also significant.</p><p>　　Conclusions:</p><p>　　1. With intracranial infection children, the levels of H2S and NO increased

65、in</p><p>　　cerebrospinal fluid and serum , suggesting that endogenous H2S and NO were involved in</p><p>　　the pathogenesis and development of intracranial infection.</p><p>　　2. W

66、ith intracranial infection children, the levels of H2S and NO have a significant</p><p>　　difference in CSF and serum, indicated the detection of NO and H2S was meaningful in the</p><p>　　differ

67、ential diagnosis and diagnosis with different types of intracranial infection.</p><p>　　Keywords: children; intracranial infection; hydrogensulfide；nitric oxide；cerebrospinal</p><p>　　fluid；seru

68、m；</p><p><b>　　6</b></p><p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p><b>　　前言</b></p><p>　　顱內(nèi)感染是兒童常見及多發(fā)疾病，病原多為細(xì)菌、病毒或結(jié)核感染，不同病原體</p><p>　　引起的顱

69、內(nèi)感染在早期臨床表現(xiàn)不典型或較相似，且傳統(tǒng)的腦脊液檢查受到多種因素</p><p>　　的影響：如院外抗生素的反復(fù)使用，病程持續(xù)的時(shí)間，家屬不愿接受有創(chuàng)檢查，患兒</p><p>　　不配合，腰椎穿刺術(shù)不能完成等，故在早期鑒別患兒不同病原顱內(nèi)感染有較大的困難，</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)希望通過對(duì)顱內(nèi)感染患兒血清和腦脊液中 NO 和 H2S 含量的檢測(cè)，尋找快速有&

70、lt;/p><p>　　效的輔助診斷手段，以鑒別不同病原體腦炎。</p><p>　　近年的研究表明，NO 和 H2S 具有多種生理功能，并在多種疾病各系統(tǒng)的病理和生</p><p>　　理過程中起重要作用.在人類，大鼠及牛的大腦中，已經(jīng)測(cè)量出相對(duì)較高水平的 NO</p><p>　　和 H2S。NO 和 H2S 是機(jī)體內(nèi)重要的氣體信號(hào)分子，NO

71、 可與細(xì)胞內(nèi)的靶分子結(jié)合從而觸</p><p>　　發(fā)多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，NO 參與神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)控，神經(jīng)的分泌功能，</p><p>　　調(diào)控睡眠，體溫和突觸可塑性調(diào)節(jié)；NO 還可能參與神經(jīng)退行性疾病，腦缺血，腫瘤，</p><p>　　炎癥，神經(jīng)元老化、損傷及死亡的發(fā)病機(jī)理及精神活動(dòng)、行為調(diào)節(jié)、記憶、發(fā)育等過</p><p>

72、　　程。在周圍神經(jīng)系統(tǒng)，NO 參與免疫反應(yīng)和局部血流量的調(diào)節(jié)，介導(dǎo)血管的擴(kuò)張和平</p><p>　　滑肌的松弛。此外 NO 還對(duì)區(qū)分嗅覺的氣味、調(diào)節(jié)視覺的適應(yīng)性及傳遞痛覺的信號(hào)過</p><p>　　程起一定的調(diào)節(jié)作用。但是當(dāng) NO 處于高濃度時(shí)，將對(duì)神經(jīng)細(xì)胞產(chǎn)生神經(jīng)毒性作用。</p><p>　　近年研究還發(fā)現(xiàn)，NO 作為逆行性遞質(zhì)負(fù)反饋地調(diào)節(jié) NMDA 受體活

73、性，從而具有內(nèi)源性</p><p>　　抗癲癇作用。NO 是機(jī)體內(nèi)重要的信使分子、免疫調(diào)節(jié)分子和效應(yīng)分子的觀點(diǎn)，已為</p><p>　　學(xué)術(shù)界所廣泛接受。NO 是以氨基酸 L-精氨酸為底物，由 NO 合酶（NOS）蛋白家族催</p><p>　　化產(chǎn)生的,NO 作為內(nèi)源性氣體信號(hào)分子，可介導(dǎo)炎癥反應(yīng)及作為缺氧反應(yīng)中細(xì)胞信使</p><p>

74、　　分子，有報(bào)道指出，在顱內(nèi)感染中 NO 較正常明顯增高，提示 NO 在顱內(nèi)感染的發(fā)生和</p><p>　　發(fā)展中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。隨著在各個(gè)領(lǐng)域?qū)?NO 的深入研究，運(yùn)用 NO 的生理作</p><p>　　用研究開發(fā)了各類 NO 制劑和拮抗劑，其中一部分已從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)走向臨床應(yīng)用.覃桂芬</p><p>　　報(bào)道表明，在新生兒多種疾病中，既有細(xì)胞毒作用，又有

75、免疫調(diào)節(jié)作用。</p><p>　　H2S 的生成依賴于三種酶，胱硫醚 β-合成酶（CBS），3-巰基丙酮酸硫轉(zhuǎn)移酶</p><p>　?。?MST ）和胱硫醚 γ-裂解酶（CSE）。1996 年，Abe 等首次通過實(shí)驗(yàn)證明內(nèi)源性硫</p><p>　　化氫可能是一種神經(jīng)活性物質(zhì)。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，H2S 作為一種新型的神經(jīng)調(diào)質(zhì)，可</p><p&

76、gt;　　加強(qiáng)或抑制神經(jīng)沖動(dòng)在神經(jīng)元的傳遞。H2S 參與認(rèn)知記憶，神經(jīng)保護(hù)和調(diào)節(jié)心肺功能。</p><p>　　在周圍神經(jīng)系統(tǒng)， H2S 可能參與心肺和胃腸功能調(diào)控以及炎癥和疼痛發(fā)病過程。在利</p><p><b>　　7</b></p><p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p>　　

77、用大鼠進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)中，證實(shí)硫化氫在顱內(nèi)感染發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用。王俊科等</p><p>　　報(bào)道指出，H2S 對(duì)神經(jīng)功能、腦血管功能及神經(jīng)內(nèi)分泌均有調(diào)節(jié)作用，在外周組織，</p><p>　　H2S 對(duì)心臟缺血再灌注損傷有保護(hù)作用，并通過調(diào)節(jié)腎素活性和血管張力起到降壓作</p><p>　　用。它還可以通過抑制胰島素的釋放，誘導(dǎo)小鼠生長(zhǎng)停滯狀態(tài),同時(shí) H2S 與

78、一些遺傳</p><p>　　性疾病腦損害有關(guān)。H2S 為近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的新型內(nèi)源性氣體信號(hào)分子，雖已證實(shí)其在多</p><p>　　種疾病的生理和病理過程中起重要作用，但其在顱內(nèi)感染中的變化水平及作用機(jī)制國(guó)</p><p><b>　　內(nèi)外還很少有報(bào)道。</b></p><p>　　H2S 和 NO 水平在多種感染性疾病中

79、均有升高，考慮其在各系統(tǒng)的多種疾病中發(fā)揮</p><p>　　介導(dǎo)抗炎和炎癥的雙重作用，且有報(bào)道指出 H2S 和 NO 水平主要與感染的嚴(yán)重程度和</p><p>　　病原的類型有關(guān)，與腦脊液檢查相比，抗生素的使用、病程持續(xù)的時(shí)間對(duì)其檢查結(jié)果</p><p>　　影響相對(duì)較小，故本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)不同病原顱內(nèi)感染患兒血清和腦脊液中 H2S 和 NO 水</p>

80、<p>　　平的測(cè)定，有望在不同病原顱內(nèi)感染的診斷及鑒別診斷當(dāng)中開辟一條新途徑。</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)將以顱內(nèi)感染患兒血清和腦脊液中 NO 和 H2S 含量與非顱內(nèi)感染患兒對(duì)照</p><p>　　組之間進(jìn)行分析比較，以及不同類型顱內(nèi)感染患兒血清和腦脊液中 NO 和 H2S 的變化</p><p>　　水平比較，探討顱內(nèi)感染患兒血清和腦脊液中 N

81、O 和 H2S 含量的變化與不同類型顱內(nèi)</p><p>　　感染發(fā)病之間的關(guān)系及 NO 和 H2S 在顱內(nèi)感染發(fā)病中的相互作用，探討其臨床變化及</p><p>　　發(fā)展規(guī)律，尋找快速輔助診斷手段，以鑒別不同病原體腦炎，有助于早期診斷和及時(shí)</p><p>　　治療，最大程度改善愈后和減少腦損傷。</p><p><b>　　8&

82、lt;/b></p><p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p><b>　　對(duì)象和方法</b></p><p><b>　　1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象與分組</b></p><p>　　1.1實(shí)驗(yàn)組納入標(biāo)準(zhǔn)：實(shí)驗(yàn)組患兒為2011年6月至2012年12月入住南華大學(xué)附<

83、/p><p>　　屬第二醫(yī)院兒科，年齡在1月以上并且14歲以下，按照《實(shí)用兒科學(xué)》第7版中制定的</p><p>　　標(biāo)準(zhǔn)，通過臨床表現(xiàn)、體格檢查、腦電圖和影像學(xué)檢測(cè)、腦脊液檢查符合結(jié)核性腦膜</p><p>　　炎、化膿性腦膜炎和病毒性腦炎。</p><p>　　1.2實(shí)驗(yàn)組排除標(biāo)準(zhǔn)：患兒年齡大于14歲或小于1月應(yīng)予排除，由于NO和H2S<

84、;/p><p>　　介導(dǎo)炎癥及抗炎反應(yīng)，需排除有并發(fā)癥患兒如合并肺炎、腸炎敗血癥等感染性疾病，</p><p>　　另需排除缺氧缺血性腦病、腦癱、中毒、顱內(nèi)占位性病變等非感染性顱內(nèi)疾病。</p><p>　　1.3實(shí)驗(yàn)組:選取 2011年6月至2012年12月入住南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院兒科的</p><p>　　顱內(nèi)感染性疾病的患兒68例，入院時(shí)完

85、善血生化、血常規(guī)、頭顱CT、頭顱MRI、腦</p><p>　　電圖及腦脊液檢查，診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合《實(shí)用兒科學(xué)》第7版中制定的標(biāo)準(zhǔn)[1]，通過臨</p><p>　　床表現(xiàn)、腦電圖和影像學(xué)檢測(cè)和腦脊液檢查以及對(duì)治療的反應(yīng)加以明確。其中病毒性</p><p>　　腦炎30例，男16例，女14例；年齡5個(gè)月～12歲，平均4.8歲；臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、不同</p>

86、<p>　　程度意識(shí)障礙、抽搐和顱內(nèi)壓增高，6例有腦膜刺激征表現(xiàn)；其中腦電圖異常有24人，</p><p>　　腦電圖表現(xiàn)為局限性或彌漫性異常慢波背景活動(dòng)，少數(shù)伴有棘-慢綜合波、棘波；頭</p><p>　　顱CT異常4例，表現(xiàn)為腦實(shí)質(zhì)密度減低；頭顱MRI異常2例，表現(xiàn)為兩側(cè)側(cè)腦室旁及</p><p>　　胼胝體見異常信號(hào)，TIWI呈稍高信號(hào)，T2WI呈

87、低信號(hào)，DWI部分呈高信號(hào)。腦脊液</p><p>　　外觀清亮，檢查結(jié)果部分正?；騼H有腦脊液常規(guī)白細(xì)胞輕度增高，計(jì)數(shù)數(shù)個(gè)至數(shù)十個(gè)，</p><p>　　腦脊液生化糖輕度降低、蛋白稍增高?；撔阅X膜炎22例(化腦組)，男12例，女10例；</p><p>　　年齡1個(gè)月～10歲，平均4.3歲；臨床上以發(fā)熱、意識(shí)障礙、顱內(nèi)壓增高、抽搐和腦膜</p>&l

88、t;p>　　刺激征為主要表現(xiàn)；腦電圖異常20例，表現(xiàn)為基本節(jié)律減慢或者陣發(fā)性高波幅慢波增</p><p>　　多，頭顱CT異常10例，表現(xiàn)為增強(qiáng)后腦膜和腦皮層增強(qiáng)信號(hào)，2例重型病例并發(fā)硬膜</p><p>　　下積液、腦積水等；頭顱MRI異常5例，3例顯示腦溝變淺消失，腦回飽滿，皮層下及</p><p>　　皮層彌漫性長(zhǎng)T1、長(zhǎng)T2信號(hào)，2例可見硬膜下積液及腦

89、積水。腦脊液外觀渾濁，呈米</p><p><b>　　9</b></p><p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p>　　湯水樣，壓力明顯增高，常規(guī)白細(xì)胞計(jì)數(shù)數(shù)百至數(shù)千，生化蛋白明顯增高，糖降低。</p><p>　　結(jié)核性腦膜炎16例，男8例，女8例；年齡10個(gè)月～13歲，平均5.2歲

90、；臨床表現(xiàn)大多</p><p>　　先有不規(guī)則發(fā)熱，后出現(xiàn)意識(shí)障礙、抽搐、腦膜刺激征及顱高壓表現(xiàn)，常伴有性格改</p><p>　　變；腦電圖異常14例，表現(xiàn)為陣發(fā)性高波幅慢波增多或者基本節(jié)律減慢，偶有棘-慢</p><p>　　綜合波、棘波；腦部CT異常9例，表現(xiàn)為腦池密度增高、模糊，基底核陰影增強(qiáng)，腦</p><p>　　室擴(kuò)大、腦鈣化形

91、成，腦水腫或局灶性梗死癥；頭顱MRI異常4例，表現(xiàn)為腦實(shí)質(zhì)內(nèi)</p><p>　　可見結(jié)節(jié)狀信號(hào)影，環(huán)形強(qiáng)化1例，均勻明顯強(qiáng)化3例，雙額頂葉腦溝增寬，伴有腦室</p><p>　　擴(kuò)大及腦積水。腦脊液壓力增高，外觀呈毛玻璃樣，常規(guī)白細(xì)胞分類以單核細(xì)胞為主，</p><p>　　計(jì)數(shù)數(shù)十至數(shù)百個(gè)，腦脊液生化糖降低、蛋白增高。</p><p>　

92、　1.4對(duì)照組：20例患兒為擇期手術(shù)行蛛網(wǎng)膜下腔麻醉，其血常規(guī)、生化、腦脊</p><p>　　液、檢查無(wú)異常，除外感染性疾病及神經(jīng)系統(tǒng)器質(zhì)性病變,年齡6月~14歲，平均4.5歲；</p><p>　　男12例,女8例；各組性別、年齡及病程無(wú)明顯差異。</p><p><b>　　2.主要儀器及試劑</b></p><p&g

93、t;<b>　　2.1.主要儀器</b></p><p>　　Fingli 高速離心機(jī) LDZ5—2 型——北京醫(yī)用離心機(jī)廠</p><p>　　XLJ-II 型離心沉淀機(jī)——………南京第一醫(yī)療器械廠</p><p>　　SANYO 醫(yī)用低溫冰箱——………日本三洋電機(jī)株式會(huì)社</p><p>　　721 型分光光度計(jì)——

94、……………上海第三分析儀器廠</p><p>　　XW-80A 旋渦混合器——…………上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠</p><p>　　1000u1、200ul、10u1 微量移液器及玻璃試管，吸頭、EP 管、PP 塑料管等。</p><p><b>　　2.2．主要試劑</b></p><p>　　2.2.1 硫化氫測(cè)定需用試劑

95、</p><p>　　硫氫化鈉(分析純)——………………………產(chǎn)自美國(guó) sigma 公司</p><p>　　醋酸鋅、三氯化鐵、三氯醋酸、對(duì)苯二胺鹽酸鹽，均為分析純級(jí)</p><p><b>　　10</b></p><p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p>　　

96、——產(chǎn)白天津科密歐試劑公司</p><p><b>　　2.2.2</b></p><p>　　一氧化氮測(cè)定需用試劑</p><p>　　一氧化氮測(cè)定試劑盒由解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心生產(chǎn)，內(nèi)含緩沖液(用前用去</p><p>　　離子水稀釋至 1000ml)、鎘粒、0.1mol／L KNO3 貯存液、去蛋白試劑、活化劑、

97、絡(luò)活</p><p>　　劑、Griess 試劑 A、Griess 試劑 B。</p><p><b>　　3． 實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p><b>　　3.1</b></p><p><b>　　3.1.1</b></p><p>　　血清及腦脊

98、液硫化氫(H2S)測(cè)定</p><p>　　血清及腦脊液硫化氫測(cè)定原理</p><p>　　先用血清及腦脊液中的醋酸鋅與硫離子充分反應(yīng)形成硫化鋅沉淀而固定下來(lái)，再</p><p>　　用對(duì)苯二胺鹽酸鹽和三氯化鐵顯色，用分光光度計(jì)檢測(cè)吸光度，根據(jù)硫化氫標(biāo)準(zhǔn)曲線</p><p>　　計(jì)算血清及腦脊液中硫化氫的含量。</p><

99、p><b>　　3.1.2</b></p><p>　　硫化氫測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線制作</p><p>　　以硫氫化鈉配制成濃度為 200umol／L 的溶液，然后按表 1 配制成濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)</p><p>　　液，按照實(shí)驗(yàn)測(cè)定硫氫化鈉過程測(cè)定各梯度吸光度，依據(jù)硫氫化鈉濃度對(duì)應(yīng)吸光度繪</p><p>　　制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見

100、圖 1)。</p><p>　　NaHS 濃度（umol/L）</p><p>　　200 umol/LNaHS（ul）</p><p><b>　　三蒸水（ul）</b></p><p><b>　　20</b></p><p><b>　　100</b&g

101、t;</p><p><b>　　900</b></p><p><b>　　40</b></p><p><b>　　200</b></p><p><b>　　800</b></p><p><b>　　60</

102、b></p><p><b>　　300</b></p><p><b>　　700</b></p><p><b>　　80</b></p><p><b>　　400</b></p><p><b>　　600&

103、lt;/b></p><p><b>　　100</b></p><p><b>　　500</b></p><p><b>　　500</b></p><p>　　表 1 硫氫化鈉標(biāo)準(zhǔn)液配制</p><p><b>　　11</b

104、></p><p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p><b>　　120</b></p><p><b>　　100</b></p><p><b>　　80</b></p><p><b>　　60&l

105、t;/b></p><p><b>　　40</b></p><p><b>　　20</b></p><p><b>　　0</b></p><p><b>　　0</b></p><p><b>　　0.2<

106、;/b></p><p><b>　　0.4</b></p><p><b>　　0.6</b></p><p><b>　　吸光度</b></p><p>　　圖 1 H2S 標(biāo)準(zhǔn)曲線</p><p>　　3.1.3 血清硫化氫測(cè)定方法</

107、p><p>　　H2S測(cè)定采用去蛋白法[2]往事先準(zhǔn)備好的玻璃試管中加入0.5m1 1％醋酸鋅后加</p><p>　　入0.1m1血清或腦脊液標(biāo)本，振蕩搖勻，再先后加入30mmol／L三氯化鐵0.5ml和20mmo1</p><p>　?。疞對(duì)苯二胺鹽酸鹽0.5ml，室溫孵育20min，使之充分顯色。加入10％三氯醋酸lml，</p><p>

108、　　用蒸餾水補(bǔ)足體積至5m1。離心6000r／min，時(shí)間5min，然后吸出上清夜，測(cè)上清夜</p><p>　　在670nm波長(zhǎng)處吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算上清液中H2S的含量。</p><p>　　3. 2 血清及腦脊液一氧化氮(NO)測(cè)定</p><p>　　3.2.1 血清及腦脊液一氧化氮(NO)測(cè)定原理</p><p>　　由于 N

109、O 在生物體內(nèi)半衰期短，含量低，直接測(cè)定十分困難，因而在醫(yī)學(xué)研究中</p><p>　　常用測(cè)定 NO 代謝終產(chǎn)物—NO3-、NO2-的間接測(cè)定方法。NO 在血清及腦脊液中形成的 NO2-</p><p>　　很快轉(zhuǎn)變成 NO3- (一小時(shí)內(nèi)>95％)，因此血清及腦脊液中的 NO2-濃度很低，血清及腦</p><p><b>　　-</b>

110、;</p><p><b>　　NO 水平。</b></p><p>　　3.2.2 一氧化氮測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作</p><p>　　以試劑盒中硝酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品配制成濃度為 200umol／L 溶液，再按表 2 配制梯度標(biāo)</p><p>　　準(zhǔn)液，按照 NO 測(cè)定方法分別測(cè)定吸光度，依據(jù)其吸光度與標(biāo)準(zhǔn)液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線&l

111、t;/p><p><b>　　(見圖 2)。</b></p><p><b>　　12</b></p><p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p>　　NO 濃度（umol/L）</p><p>　　200 umol/L KNO3（ul）</

112、p><p><b>　　三蒸水（ul）</b></p><p><b>　　20</b></p><p><b>　　100</b></p><p><b>　　900</b></p><p><b>　　40</b&g

113、t;</p><p><b>　　200</b></p><p><b>　　800</b></p><p><b>　　60</b></p><p><b>　　300</b></p><p><b>　　700<

114、/b></p><p><b>　　80</b></p><p><b>　　400</b></p><p><b>　　600</b></p><p><b>　　100</b></p><p><b>　　500

115、</b></p><p><b>　　500</b></p><p>　　表 2 NO 標(biāo)準(zhǔn)液的配制</p><p><b>　　120</b></p><p><b>　　100</b></p><p><b>　　80</

116、b></p><p><b>　　60</b></p><p><b>　　40</b></p><p><b>　　20</b></p><p><b>　　0</b></p><p><b>　　0</b&

117、gt;</p><p><b>　　0.1</b></p><p><b>　　0.2</b></p><p><b>　　0.3</b></p><p><b>　　0.4</b></p><p><b>　　0.5&l

118、t;/b></p><p><b>　　0.6</b></p><p><b>　　吸光度</b></p><p>　　圖 2 NO 標(biāo)準(zhǔn)曲線</p><p>　　3.2.3 一氧化氮測(cè)定方法</p><p>　　取玻璃管，加入 0.75ml 血清或腦脊液和 0.15m

119、l 去蛋白試劑，充分混勻，放置</p><p>　　5min 后離心 2000 轉(zhuǎn)／分鐘， 15 分鐘去蛋白．另取試管，按表 3 流程操作．</p><p><b>　　13</b></p><p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p><b>　　加入成分（ml）</b&g

120、t;</p><p><b>　　緩沖液（ml）</b></p><p><b>　　空白管</b></p><p><b>　　1.2</b></p><p><b>　　測(cè)定管</b></p><p><b>　　0.

121、8</b></p><p><b>　　標(biāo)準(zhǔn)管</b></p><p><b>　　0.9</b></p><p>　　去蛋白血清或腦脊液（ml） —</p><p><b>　　0.3</b></p><p><b>　　—<

122、;/b></p><p><b>　　絡(luò)合劑（ml）</b></p><p><b>　　—</b></p><p><b>　　0.1</b></p><p><b>　　—</b></p><p>　　不同稀釋濃度 KNO

123、3（ml） —</p><p><b>　　—</b></p><p><b>　　0.3</b></p><p><b>　　表 3</b></p><p>　　鎘粒倒進(jìn) 500ml 燒杯中，用去離子水沖洗 3 次，用緩沖液沖洗 1 次，濾紙吸干水</p>&l

124、t;p>　　后浸泡在活化劑溶液中攪拌 1-2 分鐘，再用緩沖液沖洗 3 次，用濾紙徹底吸干水分，</p><p>　　加入管至液面，室溫放置 90min，從中吸出液體 0.4ml 轉(zhuǎn)移到另一試管，按表 4 流程</p><p><b>　　操作：</b></p><p><b>　　加入成分（ml）</b></

125、p><p>　　鎘還原空白液（ml）</p><p>　　鎘還原去蛋白溶液（ml）</p><p>　　鎘還原 KNO3（ml）</p><p>　　Griess 試劑 A（ml）</p><p><b>　　空白管</b></p><p><b>　　0.4<

126、/b></p><p><b>　　—</b></p><p><b>　　—</b></p><p><b>　　0.4</b></p><p><b>　　測(cè)定管</b></p><p><b>　　—</

127、b></p><p><b>　　0.4</b></p><p><b>　　—</b></p><p><b>　　0.4</b></p><p><b>　　標(biāo)準(zhǔn)管</b></p><p><b>　　—<

128、/b></p><p><b>　　—</b></p><p><b>　　0.4</b></p><p><b>　　0.4</b></p><p>　　混勻，室溫放置 5 分鐘</p><p>　　Griess 試劑 B（ml）</p&g

129、t;<p><b>　　0.4</b></p><p><b>　　0.4</b></p><p><b>　　0.4</b></p><p><b>　　表 4</b></p><p>　　混勻，室溫放置 5 分鐘，空白管調(diào)零比色，選擇波長(zhǎng)

130、 546nm，讀取吸光度。根據(jù)</p><p>　　吸光度、不同稀釋濃度 KNO3 與標(biāo)準(zhǔn)液所作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品硝酸鹽濃度。</p><p><b>　　14</b></p><p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p><b>　　4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理</b></p

131、><p>　　實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較用 t 檢驗(yàn)，多組間比較用方差分析(F</p><p>　　檢驗(yàn))，兩兩比較用 q 檢驗(yàn)，H2S 與 NO 之間的關(guān)系采用相關(guān)回歸分析。數(shù)據(jù)經(jīng) SPSS</p><p>　　20.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理，P<0.05 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。</p><p><b>　　15</

132、b></p><p><b>　　萬(wàn)方數(shù)據(jù)</b></p><p><b>　　結(jié)</b></p><p><b>　　果</b></p><p>　　1、各組患兒腦脊液中 H2S、NO 水平比較</p><p>　　四組患兒腦脊液中 H2S 和

133、NO 水平經(jīng)單因素方差分析，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩</p><p>　　組之間再進(jìn)一步經(jīng)兩兩比較，患兒腦脊液中 H2S 含量除病腦組與對(duì)照組差異沒有統(tǒng)計(jì)</p><p>　　學(xué)意義外，其他兩組間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，感染組患兒腦脊液中 H2S 水平表現(xiàn)為化膿性</p><p>　　腦膜炎組最高、結(jié)核性腦膜炎組次之、病毒性腦炎組最低；患兒腦脊液中 NO 含量，</p&

134、gt;<p>　　各兩組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，顱內(nèi)感染組患兒腦脊液中 NO 水平表現(xiàn)為結(jié)核性腦膜</p><p>　　炎組最高、化膿性腦膜炎組次之、病毒性腦炎組最低。(結(jié)果見表 5)</p><p><b>　　表 5</b></p><p>　　顱內(nèi)感染患兒腦脊液中 H2S 和 NO 的水平(x±s)</p>