亞治療劑量四環(huán)素飼喂對牛源微生物耐藥基因的影響.pdf

1、以低于治療水平的氯四環(huán)素(CT)，以及低于治療水平的氯四環(huán)素和治療水平的氧四環(huán)素組合(CT-OX)兩種方式分別對肉牛進(jìn)行抗生素處理，研究其對腸道大腸桿菌耐藥基因型的影響。糞便樣品采自商業(yè)肉牛飼養(yǎng)場，并有詳實(shí)的抗生素使用歷史記錄，通過抗菌藥物紙片法和稀釋法敏感性試驗(yàn)測試分離出的大腸桿菌對四環(huán)素、氧四環(huán)素和氯四環(huán)素的敏感性。利用tet(A)，tet(B)和tet(C)基因的引物進(jìn)行多重PCR試驗(yàn)，檢測對四環(huán)素耐藥或中介的細(xì)菌樣品(176個)

2、，結(jié)果發(fā)現(xiàn)全部樣品均攜帶一種或者兩種耐藥基因，tet(A)在兩組樣品中的流行基本相同，但CT組中tet(B)的流行比例較CT-OX組小(P<0.05)，而tet(C)的流行比例則較大(P<0.05)。同時，在對四環(huán)素表現(xiàn)為中介的樣品(52個)檢測結(jié)果中，發(fā)現(xiàn)其中92.3％呈現(xiàn)出攜帶tet(C)基因。另外，最小抑菌濃度值(MICs)結(jié)果表明，藥物敏感性同時取決于四環(huán)素類別和耐藥基因型兩方面的因素。利用real-time PCR在轉(zhuǎn)錄水平上

3、分析tet(C)基因，發(fā)現(xiàn)耐藥型與中介型并非上游調(diào)控造成。但是，對tet(C)基因的測序分析發(fā)現(xiàn)耐藥型的第1063處堿基由T突變?yōu)镚。由上述數(shù)據(jù)可以看出，對肉牛的四環(huán)素飼喂種類可以影響到大腸桿菌的耐藥基因流行。
　　將肉牛分為亞治療劑量氯四環(huán)素的飼喂組及其對照組，在對其處理60天后進(jìn)行糞便與咽部分泌物樣品的采集，且對另一部分肉牛進(jìn)行飼喂前后同一動物的樣品采集，提取其宏基因組 DNA，研究其中四環(huán)素耐藥基因、磺胺耐藥基因和紅霉素耐藥

4、基因的濃度變化。結(jié)果表明，亞治療劑量四環(huán)素的飼喂對tet(B)基因濃度的影響是顯著的，四環(huán)素的存在的確對該基因的存在產(chǎn)生了選擇壓力；糞便中攜帶tet(C)基因的大腸桿菌數(shù)目較少，因此 tet(C)基因在糞便中的濃度相對較低；咽部分泌物中 tet(H)基因濃度較高；四環(huán)素處理同樣對tet(M)、tet(O)和tet(W)基因的選擇壓力也是明顯的，而糞便樣品中這4類基因的濃度較高。對于磺胺耐藥基因來說，sul2基因在糞便樣品中表現(xiàn)出了較高的

5、濃度。在紅霉素耐藥基因中，亞治療劑量四環(huán)素的飼喂對 erm(A)和erm(X)基因的影響是較為顯著的。
　　通過對肉牛給予低于治療水平的不同種類抗生素，研究其對廢棄糞便微生物群落中四環(huán)素耐藥基因數(shù)量與持久性的影響。試驗(yàn)肉牛被分成不同的抗生素處理組：氯四環(huán)素組，氯四環(huán)素和磺胺甲嘧啶組，以及對照組。將每個圍欄中所有動物的新鮮糞便混勻?yàn)橐环莼旌蠘悠纷鳛槟Ｊ綐悠?每個處理組3份)，分別在露天放置的第7、14、28、42、56、70、84、

6、98、112、126和175天時采樣并提取DNA，利用real-time PCR方法測定四環(huán)素耐藥基因tet(B)，tet(C)，tet(L)，tet(M)，tet(W)以及16S-rRNA的濃度。結(jié)果顯示，16S-rRNA的濃度在不同處理間相似，在56天內(nèi)保持增加(P<0.05)；總體上看，四環(huán)素組的耐藥基因初始濃度較高(P<0.05)；所有處理組的tet(B)和tet(C)濃度到56天時均增長了1～2個對數(shù)級，到175天時又降低到初