單增李斯特菌四環(huán)素耐藥基因(tetM)接合轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、單增李斯特菌是近20年才逐步被人們認(rèn)識(shí)的一種人畜共患病的致病菌。該菌是李斯特菌屬中致病力最強(qiáng)的細(xì)菌，也是迄今發(fā)現(xiàn)唯一能對(duì)人致病的、典型的胞內(nèi)寄生菌。該菌可引發(fā)腦膜炎、腦炎、敗血癥、心內(nèi)膜炎、膿腫和局部的膿性損傷，也可造成孕婦流產(chǎn)、死胎等，其死亡率較高，可達(dá)30％以上。隨著臨床不斷應(yīng)用抗菌藥物預(yù)防和治療本病，導(dǎo)致不斷出現(xiàn)對(duì)一種或多種抗菌藥物耐受的單增李斯特菌株。其中發(fā)現(xiàn)最早、耐藥性最高的是四環(huán)素耐藥菌株，且研究表明，單增李斯特菌的四環(huán)素耐

2、藥株主要攜帶tetM耐藥基因。tetM基因常與質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子等可移動(dòng)成分相連，通過(guò)質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子在菌群間進(jìn)行轉(zhuǎn)移。tetM也能通過(guò)接合作用在單增李斯特菌株間，及從單增李斯特菌轉(zhuǎn)移到糞腸球菌中。但目前為止，國(guó)內(nèi)外尚未有文獻(xiàn)報(bào)道單增李斯特菌四環(huán)素耐藥株攜帶的tetM基因是否還能向其他致病菌轉(zhuǎn)移。因此，為了進(jìn)一步探討單增李斯特菌四環(huán)素耐藥基因的水平轉(zhuǎn)移情況，也為了能夠給阻止細(xì)菌耐藥性的擴(kuò)散和新型抗菌藥物的研制提供理論基礎(chǔ)，本試驗(yàn)對(duì)哈爾濱市市售鮮肉

3、中分離的單增李斯特菌四環(huán)素耐藥株攜帶的耐藥基因tetM的水平傳播進(jìn)行了研究。
　　 聯(lián)合應(yīng)用科瑪嘉顯色培養(yǎng)基法、API試劑條法和PCR法，從哈爾濱市市售158件鮮肉（雞肉、豬肉、牛肉、羊肉）中分離鑒定出23株單增李斯特菌，分離率為14.56％。其中，鮮豬肉分離率最高，達(dá)20.00％。
　　 采用紙片擴(kuò)散法對(duì)分離的23株單增李斯特菌進(jìn)行四環(huán)素耐藥菌株的篩選。共篩選出3株四環(huán)素耐藥株。另對(duì)其他20種抗菌藥物進(jìn)行藥物敏感性測(cè)定

4、，結(jié)果表明，除頭孢噻吩外分離株對(duì)其余藥物均存在不同程度的耐藥情況。其中耐藥率最高的是多黏菌素B，達(dá)65.2％；諾氟沙星、頭孢噻肟、磷霉素、林可霉素和呋喃妥因的耐藥率也較高，均在30.0％以上。且耐藥譜分析表明，23株單增李斯特菌中僅有1株對(duì)21種抗菌藥物敏感或中度敏感，其余分離株均對(duì)一種或多種抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性。其中單耐藥菌株占21.7％（5/23）；二耐菌株占13.0％（3/23）；三耐菌株占4.4％（1/23）；四耐菌株占8.7％（

5、2/23）；五耐菌株占26.1％（6/23）；六耐菌株占8.7％（2/23）；七耐菌株占4.4％（1/23）；十五耐菌株占8.7％（2/23），同時(shí)耐2種以上抗菌藥的耐藥菌株高達(dá)17株。
　　 采用PCR法對(duì)3株單增李斯特菌株四環(huán)素耐藥株的耐藥基因進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，3株單增李斯特菌四環(huán)素耐藥株均攜帶tetM基因，對(duì)四環(huán)素的耐受性與tetM基因的攜帶呈相關(guān)性。
　　 以單增李斯特菌四環(huán)素耐藥株D38為供體菌株，以豬鏈球菌

6、紅霉素耐藥株B22為受體菌株進(jìn)行tetM基因的接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)，采用PCR方法對(duì)接合子進(jìn)行鑒定，并對(duì)受體菌株B22接合前后的耐藥譜及tetM基因接合轉(zhuǎn)移前后的序列進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果表明，在含有紅霉素和四環(huán)素的選擇性TSA-YE培養(yǎng)基上共得到接合菌株19株，接合轉(zhuǎn)移率為3.8×10-7。且19株接合菌株中均擴(kuò)增到受體菌株的特異性基因cps、紅霉素耐藥基因ermB及四環(huán)素tetM，但沒(méi)有擴(kuò)增到供體菌特異性基因hly，說(shuō)明供體菌株D38中的四環(huán)素耐藥