單增李斯特菌四環(huán)素耐藥基因(tetM)接合轉移的研究.pdf

1、單增李斯特菌是近20年才逐步被人們認識的一種人畜共患病的致病菌。該菌是李斯特菌屬中致病力最強的細菌，也是迄今發(fā)現唯一能對人致病的、典型的胞內寄生菌。該菌可引發(fā)腦膜炎、腦炎、敗血癥、心內膜炎、膿腫和局部的膿性損傷，也可造成孕婦流產、死胎等，其死亡率較高，可達30％以上。隨著臨床不斷應用抗菌藥物預防和治療本病，導致不斷出現對一種或多種抗菌藥物耐受的單增李斯特菌株。其中發(fā)現最早、耐藥性最高的是四環(huán)素耐藥菌株，且研究表明，單增李斯特菌的四環(huán)素耐

2、藥株主要攜帶tetM耐藥基因。tetM基因常與質粒、轉座子等可移動成分相連，通過質粒和轉座子在菌群間進行轉移。tetM也能通過接合作用在單增李斯特菌株間，及從單增李斯特菌轉移到糞腸球菌中。但目前為止，國內外尚未有文獻報道單增李斯特菌四環(huán)素耐藥株攜帶的tetM基因是否還能向其他致病菌轉移。因此，為了進一步探討單增李斯特菌四環(huán)素耐藥基因的水平轉移情況，也為了能夠給阻止細菌耐藥性的擴散和新型抗菌藥物的研制提供理論基礎，本試驗對哈爾濱市市售鮮肉

3、中分離的單增李斯特菌四環(huán)素耐藥株攜帶的耐藥基因tetM的水平傳播進行了研究。
　　 聯合應用科瑪嘉顯色培養(yǎng)基法、API試劑條法和PCR法，從哈爾濱市市售158件鮮肉（雞肉、豬肉、牛肉、羊肉）中分離鑒定出23株單增李斯特菌，分離率為14.56％。其中，鮮豬肉分離率最高，達20.00％。
　　 采用紙片擴散法對分離的23株單增李斯特菌進行四環(huán)素耐藥菌株的篩選。共篩選出3株四環(huán)素耐藥株。另對其他20種抗菌藥物進行藥物敏感性測定

4、，結果表明，除頭孢噻吩外分離株對其余藥物均存在不同程度的耐藥情況。其中耐藥率最高的是多黏菌素B，達65.2％；諾氟沙星、頭孢噻肟、磷霉素、林可霉素和呋喃妥因的耐藥率也較高，均在30.0％以上。且耐藥譜分析表明，23株單增李斯特菌中僅有1株對21種抗菌藥物敏感或中度敏感，其余分離株均對一種或多種抗菌藥物產生耐藥性。其中單耐藥菌株占21.7％（5/23）；二耐菌株占13.0％（3/23）；三耐菌株占4.4％（1/23）；四耐菌株占8.7％（

5、2/23）；五耐菌株占26.1％（6/23）；六耐菌株占8.7％（2/23）；七耐菌株占4.4％（1/23）；十五耐菌株占8.7％（2/23），同時耐2種以上抗菌藥的耐藥菌株高達17株。
　　 采用PCR法對3株單增李斯特菌株四環(huán)素耐藥株的耐藥基因進行檢測。結果表明，3株單增李斯特菌四環(huán)素耐藥株均攜帶tetM基因，對四環(huán)素的耐受性與tetM基因的攜帶呈相關性。
　　 以單增李斯特菌四環(huán)素耐藥株D38為供體菌株，以豬鏈球菌

6、紅霉素耐藥株B22為受體菌株進行tetM基因的接合轉移試驗，采用PCR方法對接合子進行鑒定，并對受體菌株B22接合前后的耐藥譜及tetM基因接合轉移前后的序列進行比對。結果表明，在含有紅霉素和四環(huán)素的選擇性TSA-YE培養(yǎng)基上共得到接合菌株19株，接合轉移率為3.8×10-7。且19株接合菌株中均擴增到受體菌株的特異性基因cps、紅霉素耐藥基因ermB及四環(huán)素tetM，但沒有擴增到供體菌特異性基因hly，說明供體菌株D38中的四環(huán)素耐藥