J亞群禽白血病的血清學調查和安徽分離株AH09-2特性研究.pdf

1、禽白血?。ˋvian Leukosis，AL）是由反轉錄病毒科甲型反轉錄病毒屬禽反轉錄病毒引起的一種禽類多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱。此病在世界各國雞群中廣泛流行，引起雞死亡和消瘦、生長發(fā)育不良，同時引起機體抵抗力下降和免疫抑制，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要疾病之一。國外一些養(yǎng)殖業(yè)較發(fā)達的國家通過淘汰患病雞群，減少垂直傳播從而達到凈化種群的目的。本研究使用IDEXX ALV抗原及抗體檢測試劑盒對安徽地區(qū)雞場祖代雞和農貿市場商品雞采集的樣本進行檢測，同時結

2、合臨床送檢病例對安徽省禽白血病的感染情況進行調查。結果發(fā)現(xiàn)存在禽白血病的感染情況，在368份血清樣品中，147份血清樣品為ALV-J抗體陽性，僅有34份血清樣品檢測為ALV-A、B抗體陽性，26份樣品同時檢測出3種抗體陽性，說明ALV存在著A、B、J三種亞群的混合感染。經ELISA、IFA、PCR檢測及測序鑒定，從陽性泄殖腔樣品和送檢病例中分離出6株病毒，依次命名為AH09/2和AH002～AH006。使用PCR方法對ALV-J分離株g

3、p85基因進行擴增和測序，序列分析表明，AH09/2株與USA 2001和ALV-J原型株HPRS-103同源性最高，分別達到96.5％和97％，AH002～AH006與HPRS-103株的同源性均在95％以上；同國內其他地區(qū)的分離株相比同源性為87.5％～96.1％，而與A、B、C、D亞群的同源性僅為9.2％～11.9％。Gp85基因是ALV-J變異程度最大的基因，尤其是野毒株gp85基因變異程度更大，序列分析的結果顯示分離株與國外毒

4、株具有很高的同源性，表明該病毒株很大可能是通過祖代種雞垂直傳播而來而，野毒感染的可能性較小。將AH09/2株gp85基因序列克隆至pGEX-6p-1原核表達載體，進行GST-gp85融合導蛋白的表達，經SDS-PAGE電泳后可觀察到大小為61KD的目的蛋白。通過Western-blot證明表達產物能與ALV-J陽性血清及ALV-J env基因單抗發(fā)生特異性反應。融合蛋白經純化后，建立了ALV-J抗體ELISA間接檢測方法，應用該方法對臨

5、床血清樣品進行檢測，結果表明，已建立的間接ELISA方法與進口IDEXX試劑盒檢測結果陽性和陰性符合率分別可以達到85％和70.97％。
　　 將分離株AH09/2經皮下注射和滴鼻2種途徑接種于3日齡以內雛雞（NDV HI＜22），然后于7日齡進行新城疫IV苗免疫，免疫一周后（ALV-J感染組NDV HI＜22，對照組24＜NDV HI＜25）用新城疫強毒HN3株對實驗組樣本攻毒。試驗結果顯示，ALV-J感染組的新城疫抗體水平明