J亞群禽白血病的血清學(xué)調(diào)查和安徽分離株AH09-2特性研究.pdf

1、禽白血病（Avian Leukosis，AL）是由反轉(zhuǎn)錄病毒科甲型反轉(zhuǎn)錄病毒屬禽反轉(zhuǎn)錄病毒引起的一種禽類(lèi)多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱(chēng)。此病在世界各國(guó)雞群中廣泛流行，引起雞死亡和消瘦、生長(zhǎng)發(fā)育不良，同時(shí)引起機(jī)體抵抗力下降和免疫抑制，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要疾病之一。國(guó)外一些養(yǎng)殖業(yè)較發(fā)達(dá)的國(guó)家通過(guò)淘汰患病雞群，減少垂直傳播從而達(dá)到凈化種群的目的。本研究使用IDEXX ALV抗原及抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)安徽地區(qū)雞場(chǎng)祖代雞和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)商品雞采集的樣本進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)結(jié)

2、合臨床送檢病例對(duì)安徽省禽白血病的感染情況進(jìn)行調(diào)查。結(jié)果發(fā)現(xiàn)存在禽白血病的感染情況，在368份血清樣品中，147份血清樣品為ALV-J抗體陽(yáng)性，僅有34份血清樣品檢測(cè)為ALV-A、B抗體陽(yáng)性，26份樣品同時(shí)檢測(cè)出3種抗體陽(yáng)性，說(shuō)明ALV存在著A、B、J三種亞群的混合感染。經(jīng)ELISA、IFA、PCR檢測(cè)及測(cè)序鑒定，從陽(yáng)性泄殖腔樣品和送檢病例中分離出6株病毒，依次命名為AH09/2和AH002～AH006。使用PCR方法對(duì)ALV-J分離株g

3、p85基因進(jìn)行擴(kuò)增和測(cè)序，序列分析表明，AH09/2株與USA 2001和ALV-J原型株HPRS-103同源性最高，分別達(dá)到96.5％和97％，AH002～AH006與HPRS-103株的同源性均在95％以上；同國(guó)內(nèi)其他地區(qū)的分離株相比同源性為87.5％～96.1％，而與A、B、C、D亞群的同源性?xún)H為9.2％～11.9％。Gp85基因是ALV-J變異程度最大的基因，尤其是野毒株gp85基因變異程度更大，序列分析的結(jié)果顯示分離株與國(guó)外毒

4、株具有很高的同源性，表明該病毒株很大可能是通過(guò)祖代種雞垂直傳播而來(lái)而，野毒感染的可能性較小。將AH09/2株gp85基因序列克隆至pGEX-6p-1原核表達(dá)載體，進(jìn)行GST-gp85融合導(dǎo)蛋白的表達(dá)，經(jīng)SDS-PAGE電泳后可觀察到大小為61KD的目的蛋白。通過(guò)Western-blot證明表達(dá)產(chǎn)物能與ALV-J陽(yáng)性血清及ALV-J env基因單抗發(fā)生特異性反應(yīng)。融合蛋白經(jīng)純化后，建立了ALV-J抗體ELISA間接檢測(cè)方法，應(yīng)用該方法對(duì)臨

5、床血清樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，已建立的間接ELISA方法與進(jìn)口IDEXX試劑盒檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性和陰性符合率分別可以達(dá)到85％和70.97％。
　　 將分離株AH09/2經(jīng)皮下注射和滴鼻2種途徑接種于3日齡以?xún)?nèi)雛雞（NDV HI＜22），然后于7日齡進(jìn)行新城疫IV苗免疫，免疫一周后（ALV-J感染組NDV HI＜22，對(duì)照組24＜NDV HI＜25）用新城疫強(qiáng)毒HN3株對(duì)實(shí)驗(yàn)組樣本攻毒。試驗(yàn)結(jié)果顯示，ALV-J感染組的新城疫抗體水平明