蛋雞J亞群禽白血病病毒的分離和部分序列測(cè)定.pdf

1、J亞群禽白血病(Avianleucosis virus subgroup J,ALV-J)是一種病毒引起的禽類腫瘤性疾病,又稱作骨髓細(xì)胞瘤病(Myelocytomatosis).J亞群禽白血病自發(fā)現(xiàn)以來(lái),僅見(jiàn)于肉雞發(fā)病的報(bào)道,該病給世界上許多國(guó)家的養(yǎng)雞業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失.2002年中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)徐鑌蕊發(fā)現(xiàn)了蛋雞J亞群禽白血病.自然發(fā)病的蛋雞表現(xiàn)為貧血、消瘦、產(chǎn)蛋下降、死亡率達(dá)10﹪,尸體剖檢可見(jiàn)卵巢、輸卵管發(fā)育不良,給蛋雞業(yè)造成很大的

2、經(jīng)濟(jì)損失,經(jīng)過(guò)病理學(xué)、免疫組化學(xué)以及PCR方法檢測(cè)ALV-Jgp85抗原,并對(duì)該病毒亞群特異性的序列進(jìn)行測(cè)定,在國(guó)內(nèi)外首次發(fā)現(xiàn)并報(bào)道了蛋雞J亞群禽白血病的自然病例.該研究采用臨床發(fā)病蛋雞的病料進(jìn)行了病毒分離.病料(肝、脾、腎)過(guò)濾除菌后接種于雞胚成纖維細(xì)胞(CEF).培養(yǎng)7天后,用ALV-Jgp85特異性單抗進(jìn)行間接熒光抗體法(IFA)檢測(cè)接種的CEF,結(jié)果發(fā)現(xiàn)CEF的胞漿內(nèi)有明顯的特異性熒光,細(xì)胞核未被染色,用免疫組化的方法檢測(cè)到AL

3、V-J囊膜特異性蛋白gp85的存在,為了進(jìn)一步對(duì)病毒核酸序列進(jìn)行分析,我們提取接種病料的CEF的總RNA,做反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR),在pol基因的3'端和gp85編碼基因的內(nèi)部設(shè)計(jì)了一對(duì)引物,擴(kuò)增得到長(zhǎng)度為545bp的ALV-J特異性片段,與預(yù)期片段大小相符,經(jīng)TaKaRa公司序列測(cè)定后,與ALV-J原型株HPRS-103的序列進(jìn)行了比較,發(fā)現(xiàn)其核苷酸同源性為97.4﹪,所編碼氨基酸的同源性為96.1﹪.該研究結(jié)果顯示我們