地方品系蛋雞群中禽白血病病毒的鑒定和J亞群禽白血病病毒受體蛋白的分離.pdf

1、自1868年Roloff報道雞淋巴肉瘤以來，禽白血病已分布于世界各地，我國也有自然病例發(fā)生。A、B亞群禽白血病病毒(ALV-A、ALV-B)引起的淋巴細(xì)胞性白血病是蛋雞群中最常見的腫瘤。J亞群是1989年分離和鑒定，主要引起肉雞髓細(xì)胞瘤。盡管實施了清除計劃，實際上ALV在商品蛋雞中仍無所不在，給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。近年來，ALV在我國養(yǎng)雞業(yè)中呈流行趨勢。本研究對地方品系蛋雞群的ALV進(jìn)行了分離和鑒定，對其前病毒基因組序列的變異進(jìn)行了

2、分析，同時對商品蛋雞ALV-J受體進(jìn)行了初步分離，為探索ALV-J致病機(jī)理提供了新材料。
　　 1.地方品系蛋雞群中禽白血病病毒的鑒定
　　 將臨床送檢樣本接種單層DF1細(xì)胞，37℃5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并維持7d，上清經(jīng)p27抗原檢測試劑盒檢測，結(jié)果為陽性，證明從樣本中分離到ALV病毒。收集感染細(xì)胞提取基因組DNA，根據(jù)ALV env基因序列設(shè)計引物，對分離毒進(jìn)行基因擴(kuò)增并測序，對測序結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果提示，分離病毒g

3、p85序列與五株A亞群的同源性高達(dá)96％，與B、C、D、E亞群ALV的gp85的氨基酸同源性僅在82.7％～86.2％之間；而與J亞群gp85的氨基酸同源性更低，為27.5％～31.4％，為了進(jìn)一步分析分離病毒的全基序列，采用分段。PCR擴(kuò)增法，并應(yīng)用RACE技術(shù)對兩側(cè)末端序列進(jìn)行擴(kuò)增，對所有擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行拼接和全基因序列分析，結(jié)果證實從地方品系蛋雞群中分離到1株ALV-A，序列分析表明，該地方品系蛋雞群分離毒株與同種亞群分離毒的全序列沒

4、有明顯差異，pol基因保守性極強(qiáng)，gag基因所編碼的P10、P19和P15蛋白序列中，P19的突變相對較高；env中的gp37保守性較高，gp85的變異性較大。
　　 2.ALV-J受體蛋白的初步分離
　　 為了弄清中國蛋雞群中ALV-J致病機(jī)理，本研究用膜蛋白提取試劑盒從SPF雞肝臟和腎臟提取膜蛋白，以293細(xì)胞作為陰性對照，DF1細(xì)胞作為陽性對照。以融合蛋白SUJ-IgGFc-Beads結(jié)合物為工具，以免疫共沉淀的方