草莓‘紅頰’快速繁殖及遺傳轉(zhuǎn)化體系研究與應用.pdf

1、本試驗以草莓栽培品種‘紅頰’為試材,研究了表面消毒劑、處理時間、外植體生長發(fā)育時期對莖尖存活率的影響,及初代培養(yǎng)基、激素、pH、糖濃度及氮源等因素對不定芽誘導的影響,并對脫毒苗果實的可溶性糖含量和氨基酸含量進行測定；并以此為基礎,進行了葉片、葉柄、短縮莖等離體再生體系研究,探討了基本培養(yǎng)基、暗培養(yǎng)、放置方式、葉齡對葉片離體再生的影響,及激素組合對葉片、葉柄、短縮莖離體再生的影響,建立了高效再生體系。利用農(nóng)桿菌介導AtCYP2基因轉(zhuǎn)化‘紅

2、頰’,獲得了19個獨立轉(zhuǎn)化子,經(jīng)PCR檢測,獲得4個陽性獨立轉(zhuǎn)化子。
　　 1‘紅頰’莖尖快繁體系的建立
　　 (1)通過對匍匐莖莖尖表面消毒效果的研究發(fā)現(xiàn)：以未展開的匍匐莖莖尖作為外植體、0.1％HgCl2附加2％吐溫-100溶液處理8 min、以MS或MS+0.5 mg/L,6-BA為初代培養(yǎng)基,外植體污染及褐化水平最低,成苗率最高,達87％。
　　 (2)繼代增殖中6-BA濃度0.3 mg/L和0.5 mg

3、/L交替使用。此外,0.5 mg/L6.BA和0.3 mg/L GA組合培養(yǎng),具有壯苗作用；而1.0mg/L6-BA和0.3 mg/L IBA組合培養(yǎng)基上能夠生產(chǎn)匍匐莖。
　　 (3)在1/2MS+0.01 mg/L NAA+20 g/t,蔗糖(pH6.0±0.2)培養(yǎng)基上,生根率最高,植株平均根數(shù)亦最高,并且根系粗壯,長勢良好。
　　 (4)對‘紅頰’進行增殖培養(yǎng)時,保持氮素總量不變,NH4NO3的氮素可分別用同形式的

4、KNO3和(NH4)2SO4等摩爾當量替代,不影響植株正常生長。與繼代增殖相比,氮素存在形式對‘紅頰’組培苗生根的影響較小。
　　 (5)‘紅頰’脫毒苗第一年果實的可溶性糖含量和游離氨基酸含量均比非脫毒苗果實的含量高。
　　 2‘紅頰’葉片、葉柄、短縮莖再生體系的建立
　　 (1)通過對葉片離體再生的研究,發(fā)現(xiàn)’紅頰’葉片離體再生的最佳誘導方式為：以近心葉第二、三片葉子為材料,遠軸面(背面)接觸培養(yǎng)基MS+2.0

5、mg/LTDZ+0.1 mg/L NAA,暗培養(yǎng)7d,愈傷組織誘導率達91.4％。
　　 (2)葉柄的不定芽最佳誘導培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L6-BA+0.5 mg/L IAA,不定芽誘導率為77.8％。
　　 (3)短縮莖離體再生的最佳誘導培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/L6-BA+0.05 mg/LNAA,愈傷組織誘導率為71.9％,愈傷組織分化率為68.7％。
　　 3‘紅頰’遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立