“禽康散”對(duì)DPV和DHV感染鴨胚及成纖維細(xì)胞的保護(hù)效應(yīng)研究.pdf

1、鴨瘟是由鴨瘟病毒(DPV)引起鴨和鵝的一種急性接觸性傳染病。不同年齡和品種的鴨均可感染該病毒，以麻鴨、番鴨和綿鴨感染性最高。在自然流行中，成年鴨和產(chǎn)蛋母鴨發(fā)病和死亡較嚴(yán)重。
　　 鴨病毒性肝炎是由鴨病毒性肝炎病毒(DHV)引起小鴨的一種高度致死性病毒傳染病。病的特征是發(fā)病急、傳播快、死亡率高。本病發(fā)病急，傳播迅速，一般死亡多發(fā)生在3～4d內(nèi)。雛鴨的發(fā)病率和死亡率均很高，1周齡內(nèi)的雛鴨病死率可達(dá)95％。
　　 鴨瘟和鴨病毒

2、性肝炎主要通過疫苗接種種鴨以及雛鴨來預(yù)防。眾多文獻(xiàn)報(bào)道，多種中藥的有效成分在細(xì)胞內(nèi)和胚內(nèi)對(duì)病毒具有明顯的拮抗作用。同時(shí)，通過近幾年的研究表明，復(fù)方中藥“禽康散”對(duì)禽類的多種細(xì)菌性疾病、病毒性疾病均有預(yù)防和治療作用，對(duì)機(jī)體免疫力的提高亦有促進(jìn)作用。鑒此，開展了“禽康散”對(duì)鴨瘟病毒和鴨病毒性肝病毒的抑制作用研究。
　　 本試驗(yàn)以復(fù)方中藥“禽康散”的水煎劑為研究對(duì)象，在鴨胚和鴨胚成纖維細(xì)胞兩個(gè)層面上研究其對(duì)鴨瘟和鴨病毒性肝炎病毒的抑制

3、效果及其作用機(jī)理，為更深入研究該中藥方劑對(duì)鴨傳染病的防治提供試驗(yàn)數(shù)據(jù)和支持。
　　 試驗(yàn)一、“禽康散”對(duì)DPV、DHV感染鴨胚的保護(hù)效應(yīng)研究將48枚10日齡非免疫鴨胚隨機(jī)分為6組，每組8枚。中藥殺毒組分別將100mg、25mg中藥與0.1ml100ELD50的病毒液先感作1h后進(jìn)行鴨胚尿囊膜接種；中藥預(yù)防組先分別接種100mg、25mg中藥24h后，再接種0.1ml100ELD50的病毒液；陽性對(duì)照組接種0.1ml100ELD5

4、0病毒液和0.1ml細(xì)胞維持液；陰性對(duì)照組接種0.2ml PBS液。試驗(yàn)結(jié)果：陽性對(duì)照組鴨胚分別在120h、144h內(nèi)全部死亡；高劑量預(yù)防組(100mg禽康散)對(duì)DHV、DPV感染的鴨胚保護(hù)率分別為100％、87.5％；低劑量預(yù)防組(25mg禽康散)對(duì)DHV、DPV感染的鴨胚保護(hù)率分別為62.5％、50％;高劑量殺毒組(100mg禽康散)對(duì)DHV、DPV感染的鴨胚保護(hù)率分別為50％、25％;低劑量殺毒組(25mg禽康散)對(duì)DHV、DPV

5、感染的鴨胚保護(hù)率分別為25％、12.50％。試驗(yàn)結(jié)果表明，“禽康散”在10日齡鴨胚內(nèi)對(duì)DHV和DPV具有顯著的殺滅和阻斷感染的作用。
　　 試驗(yàn)二、“禽康散”對(duì)鴨胚成纖維細(xì)胞(DEF)增殖的影響取培養(yǎng)良好的DEF培養(yǎng)板，每孔分別加入0、2-4、2-5、2-6、2-7、2-8g/ml中藥提取液100μ,l，每個(gè)濃度重復(fù)4孔；重復(fù)5個(gè)細(xì)胞板。分別在加藥后12h、24h、36h、48h、60h時(shí)各取1個(gè)細(xì)胞板，用MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖情

6、況。試驗(yàn)結(jié)果表明，“禽康散”對(duì)鴨胚成纖維細(xì)胞的最大安全濃度為24g/ml，在2-4～2-8g/ml濃度范圍內(nèi)對(duì)細(xì)胞有顯著的增殖作用，其中2-5g/ml的中藥提取液對(duì)DEF的增殖作用最強(qiáng)。
　　 試驗(yàn)三、“禽康散”對(duì)DPV和DHV人工感染鴨胚成纖維細(xì)胞的保護(hù)效應(yīng)研究采用了三種不同加樣方式：①不同濃度藥液(2-4～2-8g/ml)與100TCID50病毒液(DHV、DPV)等體積混合后37℃作用4h，取200μ1接種到DEF內(nèi)；②先

7、接種100μ1病毒液，4h后再分別加入各濃度梯度藥液100μl;③先加入各濃度藥液100μl，4h后再接種病毒100μ1?？瞻讓?duì)照組(細(xì)胞維持液200μl)；陽性對(duì)照組(DHV或DPV病毒100μl，細(xì)胞維持液100μl)。結(jié)果表明：“禽康散”提取液各濃度均在一定程度上降低了DHV、DPV抑制DEF生長的作用；先加入藥液的中藥預(yù)防組效果優(yōu)于其余兩種。禽康散減弱DHV對(duì)DEF的抑制作用在2-6～24g/ml濃度時(shí)，采用先加藥液后接種病毒的