斑石鯛虹彩病毒(SKIV)結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)組學(xué)及三個(gè)新型魚(yú)類細(xì)胞系的建立與部分特性.pdf

1、腫大細(xì)胞病毒是造成廣泛的淡水和海水養(yǎng)殖魚(yú)類暴發(fā)性傳染病的重要病毒性病原。國(guó)內(nèi)最早于上世紀(jì)90年代初的養(yǎng)殖鱖暴發(fā)性流行病觀察到,并最終被確認(rèn)為鱖暴發(fā)性流行病的病原。根據(jù)該病毒引起的發(fā)病鱖的臨床癥狀、病原及病理學(xué)特征定名為傳染性脾腎壞死病毒(ISKNV)。根據(jù)最新的國(guó)際病毒分類委員會(huì)第八次的分類報(bào)告(ICTV-8),ISKNV被定義為虹彩病毒科(family Iridoviridae)新成立的腫大細(xì)胞病毒屬(genus Megalocyti

2、virus)的代表種。種種未知因?yàn)?腫大細(xì)胞病毒難以在常見(jiàn)魚(yú)類細(xì)胞系上生長(zhǎng),我們此前建立了鱖仔魚(yú)細(xì)胞系MFF-1,成功解決了此類病毒的細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題。本研究中,(1)我們利用MFF-1細(xì)胞純化到大量海洋魚(yú)類來(lái)源的斑石鯛虹彩病毒(SKIV),對(duì)SKIV的結(jié)構(gòu)蛋白做了系統(tǒng)的蛋白組學(xué)鑒定,結(jié)果顯示,SKIV的主要高豐度結(jié)構(gòu)蛋白有16個(gè),全病毒蛋白有51個(gè)獲得鑒定,其中包括4病毒囊膜蛋白。細(xì)胞水平上的抗體中和作用實(shí)驗(yàn)顯示,4個(gè)重組囊膜蛋白均不具備

3、抗體中和能力,動(dòng)物免疫保護(hù)試驗(yàn)也顯示,以重組病毒蛋白為抗原免疫動(dòng)物(鱖魚(yú)),盡管能夠誘導(dǎo)較高水平的特異性抗體的產(chǎn)生,但攻毒試驗(yàn)顯示重組囊膜蛋白并非病毒的保護(hù)性抗原。(2)為了建立更多的敏感細(xì)胞系,為大規(guī)模疫苗生產(chǎn)尋找更多細(xì)胞資源,本研究從早期的鱖魚(yú)仔魚(yú)原代細(xì)胞成功培養(yǎng)出一個(gè)新的傳代細(xì)胞系MFF-2,MFF-2在細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞核型等方面與MFF-1細(xì)胞有較大的差別,但MFF-2同樣對(duì)ISKNV和SKIV高度敏感,可能作為疫苗生產(chǎn)中有用的細(xì)

4、胞候選。此外,本研究還建立了鱖腦組織原代細(xì)胞來(lái)源的克隆細(xì)胞系MB16C和錦鯉鰭條組織來(lái)源的細(xì)胞系KF-2,病毒感染試驗(yàn)顯示,MB16C和KF-2對(duì)腫大細(xì)胞病毒皆不敏感或低敏感,但KF-2對(duì)錦鯉皰疹病毒(KHV)具有一定的敏感性,利用KF-2細(xì)胞我們成功自國(guó)內(nèi)發(fā)病錦鯉分離了第一例錦鯉皰疹病毒KHV-QY08(C),基于KHV-ORF136基因和蛋白序列的多重序列分析顯示,KHV-QY08(C)與日本代表株TMSUT1(J)在進(jìn)化距離上最為