白樺BpBEE基因的功能研究.pdf

1、Brassinolide Enhanced Expression(BEE)基因編碼植物所特有的bHLH轉(zhuǎn)錄因子，是調(diào)控油菜素內(nèi)酯信號轉(zhuǎn)導的重要元件。本實驗通過構建白樺BpBEE2基因的植物過表達載體和抑制載體，進行白樺的遺傳轉(zhuǎn)化，對獲得的轉(zhuǎn)基因株系進行生長量測定和鹽、旱脅迫，驗證白樺BpBEE2基因所發(fā)揮的作用。主要研究結果如下:
　　1.根據(jù)白樺轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，獲得了3條白樺BpBEE基因，對3條白樺BpBEE基因進行生物信息學分析

2、，結果表明，3條白樺BpBEE基因均具有典型的bHLH結構域，基因序列特性非常相似，且均有5個內(nèi)含子與6個外顯子。
　　2.通過實時熒光定量PCR的方法，對3條白樺BpBEE基因的表達模式進行分析，結果表明，這3條基因在葉片，雌花，雄花，莖和頂芽中均有表達，葉中BpBEE基因表達量明顯高于其他部位。在生長旺盛時期，葉和頂芽中BpBEE基因均呈現(xiàn)上調(diào)表達，表明BpBEE基因可能參與到白樺的生長過程。BR激素處理之后，BpBEE1在早

3、期的芽和木質(zhì)部中呈顯著上調(diào);BpBEE2在早期的木質(zhì)部和韌皮部顯著上調(diào)外，其他處理時間也呈現(xiàn)不同程度的上調(diào)。表明3個白樺BpBEE基因參與BR激素應答，且BpBEE1和BpBEE2呈現(xiàn)早期應答響應。
　　3.應用Gateway技術構建白樺BpBEE2基因的植物過表達載體和酶切連接方法構建的白樺BpBEE2基因的植物抑制載體，采用根瘤農(nóng)桿菌介導的合子胚法進行白樺的遺傳轉(zhuǎn)化，通過PCR鑒定轉(zhuǎn)基因植株，結果表明，白樺BpBEE2基因已經(jīng)

4、成功整合到了植物基因組上，獲得了1個超表達株系和5個抑制表達株系。
　　4.對獲得的轉(zhuǎn)基因植株進行生長量測定。結果表明:超表達株系的生長量顯著高于野生型，而抑制表達株系則明顯低于野生型。表明超表達BpBEE2基因能提高植株的生長量。
　　5.抗鹽和抗旱的逆境脅迫分析，分別選取0.3％和0.6％ NaCl;5％和10％PEG的脅迫處理，進行鮮重和生根率統(tǒng)計。結果表明:轉(zhuǎn)基因株系并沒有顯著的提高抗鹽旱性。
　　6.克隆Bp