新孢子蟲NcSRS2和NcSAG1基因及重組蛋白免疫原性的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、新孢子蟲病是多種動(dòng)物共患的原蟲病，對(duì)牛的危害最為嚴(yán)重。新孢子蟲表面蛋白NcSRS2(Nc-p43)，NcSAG1(Nc-p36)是介導(dǎo)新孢子蟲黏附和入侵宿主細(xì)胞的主要表面蛋白，是最有希望的新孢子蟲疫苗候選抗原和診斷抗原。本研究對(duì)NcSRS2基因進(jìn)行了克隆和表達(dá)，并將該基因與NcSAG1基因融合實(shí)現(xiàn)共表達(dá)，同時(shí)初步研究了NcSRS2蛋白與NcSRS2-NcSAG1蛋白的免疫原性?！　∮梅肿由飳W(xué)軟件分析了NcSRS2，NcSAG1基因，

2、截去NcSRS2基因中N端疏水部分后，將該基因(dNcSRS2)克隆至原核表達(dá)載體pGEX-6P-1構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-dNcSRS2，在1mMIPTG誘導(dǎo)下，在大腸桿菌BL21中表達(dá)大量的目的蛋白(GST-dNcSRS2)。目的蛋白是以可溶性和包涵體兩種形式存在，分子量是62.6KD，表達(dá)量為32.3％。用GST抗體進(jìn)行Westernblot檢測(cè)，成功檢測(cè)到特異性條帶?！　cSRS2和NcSAG1基因中抗原性較強(qiáng)的片段串聯(lián)克隆

3、到同一個(gè)原核表達(dá)載體pGEX-6P-1內(nèi)，構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-tNcP43-P36，以獲取抗原性強(qiáng)的融合蛋白。在1mM的IPTG誘導(dǎo)下，目的蛋白(GST-tNcP43-P36)在大腸桿菌中以包涵體形式存在，分子量為64.5KD，表達(dá)量為14.9％。用抗GST血清進(jìn)行Westernblot檢測(cè)，成功檢測(cè)到特異性條帶?！　⒓兓腉ST-dNcSRS2蛋白和GST-tNcP43-P36蛋白三次免疫Balb/C小鼠，以檢測(cè)兩種蛋白的免疫原

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