犬新孢子蟲吉林株NcSRS2基因片段的原核表達及初步應(yīng)用.pdf

1、新孢子蟲病(Neosporiasis)是由犬新孢子蟲(Neospora caninum)寄生于犬、牛、馬、羊等多種宿主動物細胞內(nèi)而引起的一種原蟲病。該病對牛的危害尤為嚴重，主要造成孕畜流產(chǎn)、死胎以及新生犢牛的運動神經(jīng)系統(tǒng)疾病,已給畜牧業(yè)生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟損失。國外學(xué)者在新孢子蟲的致密顆粒棒狀體內(nèi)以及速殖子表面發(fā)現(xiàn)了新孢子蟲表面蛋白NcSRS2,NcSRS2表面蛋白介導(dǎo)其粘附及入侵宿主細胞，可以作為酶聯(lián)免疫吸附試驗有效的抗原成分，是最有

2、希望的新孢子蟲疫苗的侯選抗原。
　　本研究利用PCR技術(shù)擴增和克隆了1100bp犬新孢子蟲吉林株NcSRS2基因片段，對所克隆的NcSRS2基因序列與基因庫中已發(fā)表的序列（AY940488）進行比較分析。結(jié)果表明同源性達到99.8％，證明了該基因片段為犬新孢子蟲NcSRS2基因。將NcSRS2基因亞克隆至原核表達載體pGEX-4T-2，經(jīng)PCR鑒定及酶切鑒定，證明成功構(gòu)建了融合表達載體pGEX-NcSRS2。將構(gòu)建好的融合表達載體

3、，在1mmol/L的IPTG誘導(dǎo)下，在大腸桿菌BL21中得到大量表達，經(jīng)過8 h表達量達到高峰。融合蛋白 GST-NcSRS2的分子量為64.4 ku，大部分以可溶性蛋白的形式存在。用親和層析方法對GST-NcSRS2融合蛋白進行了純化，獲得了理想的純化結(jié)果。經(jīng)Western blotting免疫印跡分析，融合蛋白與犬新孢子蟲陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng)，而同剛地弓形蟲陽性血清沒有交叉反應(yīng)，說明該蛋白具有很好的抗原性和特異性。
　　本研