桉樹4個(gè)種遺傳多樣性的ISSR分析及STS標(biāo)記開發(fā)初探.pdf

1、桉樹是世界上第二大類人工造林樹種,亦是目前最重要的木漿原料林之一。桉樹種類繁多,有522種和150個(gè)變種,桉樹樹種之間容易雜交培育出超過親本的雜交種,并容易培育成優(yōu)良無(wú)性系進(jìn)行無(wú)性繁殖,但其種源關(guān)系和品種鑒定較為困難。ISSR現(xiàn)已在林木的種質(zhì)資源鑒定、遺傳作圖、基因定位、遺傳多樣性、進(jìn)化、系統(tǒng)發(fā)育、分子標(biāo)記育種等研究方面被廣泛應(yīng)用。ISSR標(biāo)記以其多態(tài)性高、穩(wěn)定性強(qiáng)、技術(shù)簡(jiǎn)便、方便快捷等優(yōu)勢(shì)必將使其在更多林木物種、更多林業(yè)領(lǐng)域獲得應(yīng)用。

2、
　　 本論文以桉樹的赤桉、巨桉、細(xì)葉桉和粗皮桉4個(gè)種18個(gè)樣品為研究材料,分析了影響桉樹ISSR-PCR的主要參數(shù),包括模板DNA、引物濃度、dNTPs、Mg2+濃度、TaqDNA聚合酶用量、退火溫度等6個(gè)因素的影響,建立了適用的ISSR-PCR的分析體系:20μL的PCR反應(yīng)體系中,1×Taq酶緩沖液,0.5 UTaq DNA聚合酶,0.6μmol/L引物,100μmol/L dNTPs,2.5mmol/LMgCl2,20n

3、g模板DNA；最佳PCR擴(kuò)增條件為:預(yù)變性:94℃3min；94℃變性30see,60℃退火45sec,72℃延伸1min5個(gè)循環(huán)；58℃退火45sec,72。C延伸1min5個(gè)循環(huán)；56℃退火45see,72℃延伸1min5個(gè)循環(huán)；54℃退火45Sec,72℃延伸1min10個(gè)循環(huán)；52°退火45sec,72℃延伸1min20個(gè)循環(huán)；共40個(gè)循環(huán)后,最后72℃延伸10min,4℃保存。
　　 根據(jù)優(yōu)化的ISSR-PCR反應(yīng)體系

4、和擴(kuò)增條件,從100條引物中篩選出12條擴(kuò)增條帶特異、條帶數(shù)適中、背景清晰、重復(fù)性好的引物,總計(jì)擴(kuò)增出120條清晰可重復(fù)的DNA條帶,其中93條是多態(tài)性條帶。每個(gè)引物可擴(kuò)增的多態(tài)條帶長(zhǎng)度范圍為300～2500 bp,數(shù)目在4～11條,平均為7.75條,多態(tài)帶百分率為77.5％。然后通過軟件POPGENE1.31、MVSP32軟件和NTSYS-pc軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行總結(jié)分析,從而得出4個(gè)種18個(gè)樣品的遺傳相似系數(shù),并繪制分子聚類圖和主坐標(biāo)