PRRSV流行毒株NSP2、PRF5遺傳變異分析及其弱毒疫苗免疫效果評價.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductiveand Respiratory Syndrome，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRS virus，PRRSV）引起的一種高度接觸性傳染病，2006～2007年，中國南部暴發(fā)以死亡率高、傳播速度快為特征的高致病性PRRSV（HP-PRRSV），給廣大養(yǎng)殖戶帶來巨大經(jīng)濟沖擊。
　　為了解我國PRRSV流行情況和不同免疫背景下發(fā)病豬群相關(guān)毒株遺傳進化和變異特點，本研

2、究對我國不同地點和時間發(fā)病豬的病料進行PRRSV流行病學(xué)檢測、病毒分離。
　　目前，疫苗免疫是預(yù)防和控制HP-PRRS的重要措施，雖然商品化弱毒疫苗較滅活苗可以更快誘發(fā)機體的特異性免疫，但在臨床使用中弱毒疫苗的免疫時間、免疫劑量及免疫次數(shù)等方面經(jīng)常出現(xiàn)使用混亂的現(xiàn)象，而且對其免疫效果仍缺乏較完善的評價體系，因此本研究對市場常用的兩種商品化PRRS活疫苗JXA1-R和CH-1R進行了免疫效果評價。研究內(nèi)容如下:
　　1.PRR

3、SV流行毒株的分離及遺傳變異分析
　　2012～2013年，本研究在湖北、湖南、廣東、河南等地采集臨床樣品720份，PRRSV檢測總陽性率為49.3％，分離得到46株遺傳免疫背景清楚的樣品，并對其部分NSP2基因、ORF5基因進行序列測定，比對顯示46株P(guān)RRSV之間部分NSP2氨基酸同源性為83.8％～100％，NSP2蛋白普遍存在不連續(xù)30個氨基酸缺失，缺失位置與高致病性JXA1相同，同時46株P(guān)RRSV之間ORF5氨基酸同源

4、性為91.0％～100％，與VR-2332相比，GP5序列出現(xiàn)多處突變，尤其是抗原表位序列，此外，N糖基化位點的位置和數(shù)量也發(fā)生了改變，對46株P(guān)RRSV的GP5TM區(qū)預(yù)測發(fā)現(xiàn)有33株序列存在氨基酸變異較高的TM1區(qū)。
　　2.HZ-31全基因組序列分析
　　分離得到一株新的PRRSV，命名為HZ-31，測序分析發(fā)現(xiàn)HZ-31的NSP2基因在471-500aa、533-561aa位點共缺失59個氨基酸，并且其基因組兩端非編碼

5、區(qū)各存在一個堿基的缺失，是一種新的變異株。
　　3.對JXA1-R活疫苗和CH-1R活疫苗進行免疫效果評價
　　PRRS活疫苗可快速刺激機體產(chǎn)生體液免疫，JXA1-R活疫苗比CH-1R活疫苗的ELISA抗體轉(zhuǎn)陽時間更早，水平更高，同時中和抗體出現(xiàn)時間更早，水平更高，在抵御強毒攻毒時，JXA1-R誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生的中和抗體可中和血清中的PRRSV，與病毒血癥的消除呈正相關(guān)。兩種活疫苗在免疫和攻毒期間均未檢測出高水平的IFN-γ。兩

6、種活疫苗在免疫期間均檢測到病毒血癥的存在，攻毒后JXA1-R組病毒血癥迅速消失，CH-1R組的病毒血癥持續(xù)存在。JXA1-R組和CH-1R組攻毒后均無鼻腔排毒，對照組輕微排毒，JXA1-R組攻毒后糞拭子無排毒，CH-1R組和對照組在攻毒后第10d均有排毒。剖檢可見JXA1-R組病變輕微，CH-1R組個別豬只肺部有出血點，肺門淋巴結(jié)充血，對照組肺部肉樣實變，肺門淋巴結(jié)嚴重充血、出血，個別豬只腎有出血點。JXA1-R組和CH-1R組在肺、脾